人肝癌细胞阿霉素耐药株

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冷冻细胞操作步骤：

1．收集对数生长期细胞；
2．以25μl台盼蓝溶液稀释25μl细胞悬液；用血球计数板计数并计算细胞存活率（至少应该在90%以上）；
3．细胞悬液在4℃ 条件下200磄离心10分钟；
4．将沉淀的细胞重新悬浮在冷冻液中（大约5?06细胞/0.5 ml 冷冻液）；
5．将细胞悬液加入到冷冻管中，每管0.5 ml；
6．将冷冻管置于-80℃冰箱中；
7．24小时后，将冷冻管移入液氮罐中；
8．在记录本或电脑中记录下每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。

细胞复苏操作步骤：
1．将冷冻管迅速由液氮转入到37℃水浴中，冷冻管的顶部保持在水面以上以避免任何污染，不定时搅拌加速解冻；
2．当细胞完全解冻后，用含70%乙醇的纱布擦拭冷冻管消毒；
3．将解冻后细胞转移到含4℃预平衡培养液的试管中；
4．细胞悬液在4℃下200磄离心10分钟；
5．弃上清，将细胞重新悬浮在新鲜培养液中；
6．将细胞转移到细胞培养瓶，CO2孵箱中培养；
7．是用倒置显微镜检查细胞存活率以及细胞密度，如果细胞密度过高，用培养液稀释至适宜浓度。

培养条件：
完全培养基：DMEM高糖培养基90%；胎牛血清10%。
培养条件：37.0C carbon dioxide（CO2）,5%

传代方法：
收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。 （一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整 个瓶消毒后放到超菌 台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下 10ml培养液在瓶内继 续培养。
（二）如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中， 倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又 将培养瓶倒转大约30 秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分 散，轻敲几下培养 培养瓶，细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中。1:3~1:6 传代；2~3天1次。

注意：传代后一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细 胞不适应而造成生长不好。
冻存方法：冻存液：基础培养基 +5%DMSO+20%FBS　
储存：液氮储存

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本公司所有细胞入库之前均经过严格的细胞质量检测和鉴定 ，所有细胞在出库之前均经过一次严格的质检认证，确保细胞到 每一位用户手里都是Z好状态。

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