谷胱甘肽测试盒 总谷胱甘肽含量测定试剂盒
测定试剂盒说明书
研究意义:
GSH/GSSG 是细胞内Z重要的氧化还原对之一。因此,测定细胞内 GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态,也是谷胱甘肽氧化还原循环的主要指标之一。此外,总谷胱甘肽(total glutathione, tGSH)含量还能够反映细胞 γ-谷氨酰循环状态。通过该试剂盒,可以获得四个指标,即 GSH 含量、GSSG 含量、总谷胱甘肽含量和 GSH/GSSG 比值。
测定原理:
利用循环法测组织中总谷胱甘肽含量,2-VP 法测 GSSG 含量。总谷胱甘肽含量=GSH+2GSSG,该指标与谷胱甘肽氧化还原循环无关,只与 γ-谷氨酰循环状态,即 GSH 合
成和降解有关。
实验中所需仪器及设备:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml 比色皿、双蒸水
试剂组成和配置:
试剂一×1 支;加双蒸水 100ml,充分溶解,4℃保存,用于试剂二和试剂三溶解;
试剂二×1 支;加试剂一 11ml 充分溶解,4℃保存;
试剂三×1 支;临用前,加试剂一 11ml 充分溶解;
试剂四×1 支,稀释液四×1 支,临用前,加 1ml 稀释液四稀释试剂四;
液体五×1 支;
试剂六×1 支,充分溶解于 50ml 双蒸水;
GSH 标准品×1 支;临用前,加双蒸水定容至 100ml,然后稀释 10 倍,则为 10μmol/L;
GSSG 标准品×1 支;临用前,加双蒸水定容至 100ml,然后稀释 10 倍,则为 10μmol/L。
样品前处理:
称取约 0.1g 样品,加 1ml 试剂六,冰上充分研磨, 8000rpm 4℃离心 10min,取上清。 (如上清不清澈,再离心 3min)
总谷胱甘肽含量测定:
1、将试剂一于 25℃预热 30min
2、按下表操作
| 标准管 | 测定管 |
试剂二 | 0.1ml | 0.1ml |
试剂三 | 0.1ml | 0.1ml |
标准品 | 0.1ml | / |
样品 | / | 0.1ml |
试剂一 | 0.7ml | 0.7ml |
试剂四 | 0.1ml | 0.1ml |
加试剂四后,迅速混匀,于 412nm处测定吸光值,记录 30s 和 150s 的数据,分别记为 A1、A2、A3 和 A4。
GSSG 含量测定:
1、将试剂一于 25℃预热 30min
2、按下表操作
| 标准管 | 测定管 |
标准品 | 0.1ml | / |
样品 | / | 0.1ml |
试剂五 | 2μL | 2μL |
加试剂五后混匀, 于37℃水浴30min后, 取0.1ml溶液进行下一步测定, 即下表中样品0.1mL。
| 标准管 | 测定管 |
试剂二 | 0.1ml | 0.1ml |
试剂三 | 0.1ml | 0.1ml |
标准品 | 0.1ml | / |
样品 | / | 0.1ml |
试剂一 | 0.7ml | 0.7ml |
试剂四 | 0.01ml | 0.01ml |
加试剂四后,迅速混匀,于 412nm 处测定吸光值,记录 30s 和 150s 的数据,分别记为 B1、
B2、B3 和 B4。
tGSH 含量计算
tGSH(μmol/g)=(A4-A3)÷(A2-A1)×标准浓度(10μmol/L)×样品测定前稀释倍数
÷样品质量(g) ,
GSSG(μmol/g)=(B4-B3)÷(B2-B1)×标准浓度(10μmol/L)×样品测定前稀释倍数
÷样品质量(g) ,
GSH(μmol/g)=tGSH-2×GSSG。
注意事项:
1、测定前请先用 1~2 个样本做预实验,如吸光值很高,则需用试剂六稀释到适当倍数,使得测定过程吸光值呈线性变化
2、配制试剂以及样品处理都需在低温下,可置于冰上
3、因为提取过程中去掉蛋白质,所以提取液不能用于测定蛋白含量。如需测样品的蛋白含
量,请事先将样品分成两份
4、测定时也可将标准品配制成不同浓度后,制作成标准曲线,然后将测定样品代入标准曲
线计算,标准品配制的浓度一般不超过 20μmol/L
谷胱甘肽测试盒 总谷胱甘肽含量测定试剂盒订购说明:
1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日Z新价格为准。
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、电话等以传真、EMail、短信、电话等形式通知我们。
运输说明:
1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝专用的箱子,然后交付给合作快递,安全快速GX放心的送至客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝专用的箱子(保温效果Z少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速GX放心的送至客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
3、常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速GX的快递保证产品快速送达您的手中。