维生素C代谢系列测试盒 脱氢抗坏血酸还原酶活性测定试剂盒
测定意义:
DHAR 存在于线粒体、细胞质和叶绿体中。DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA,调控细胞 AsA/DHA 比值,是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶。提高植物体内的DHAR 活性,可提高植物食品中 AsA 含量,进而提高植物食品的营养品质。
测定原理:
DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA, 通过测定 DHA 被还原量可计算得 DHAR 活性。
实验中所需仪器及设备:
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1ml 石英比色皿、可调式移液器、双蒸水。
试剂组成和配制:
试剂一×1 瓶,稀释液一×1 支,临用前配制,取少量双蒸水充分溶解试剂一后,加稀释液一
0.381ml,再继续加双蒸水定容至 50ml ;
试剂二×1 瓶,加 50ml 双蒸水充分溶解;
试剂三×1 支,临用前加 5.5ml 双蒸水充分溶解;
试剂四×1 瓶,临用前加双蒸水 5.5ml 充分溶解。
样品前处理:
称取约 0.1g 样品,加试剂一 1ml,冰上充分研磨,16000g 4℃离心 20min,取上清。
DHAR 测定操作:
按下表操作:
| 空白管 | 测定管 |
试剂二(ml) | 0.7 | 0.7 |
试剂三(ml) | 0.1 | 0.1 |
试剂四(ml) | 0.1 | 0.1 |
双蒸水(ml) | 0.1 | / |
提取液(ml) | / | 0.1 |
迅速混匀后,于 265nm 比色,记录 30s 和 150s 的吸光值,空白管和测定管吸光值分别记为
A1、A2 和 A3、A4。
DHAR 活性计算:
DHAR 活力单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol AsA 为 1U。
计算公式:DHAR(U/mg prot)= △A265/min×[10 6 /(ε•d)]×(V 总/V 样)/Cpr
= [(A4-A3)-(A2-A1)÷2]×[10 6 ÷(5.42×10 4 ×1)]×(1/0.1)÷Cpr
=92.25×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr;
△A265/min =(△A 测定管-△A 空白管)/2,即每分钟吸光值变化;ε :产物在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×10 4 mol/L • cm,106:摩尔分子换算成微摩尔分子;d:比色杯光径(cm) ;V 总:反应总体积(ml) ,V 样:所用样品体积(ml) ;Cpr:蛋白浓度(mg/ml) 。
注意事项:
试剂一、试剂三和试剂四均需临用前配制。
样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力。
稀释液一有挥发性和刺激性,吸取时好戴手套和口罩,好用移液管吸取。
维生素C代谢系列测试盒 脱氢抗坏血酸还原酶活性测定试剂盒订购说明:
1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。
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运输说明:
1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝专用的箱子,然后交付给合作快递,安全快速GX放心的送至客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝专用的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速GX放心的送至客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
3、常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速GX的快递保证产品快速送达您的手中。