BC2190 糖酵解系列 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 （Phosphoenolpyruv...

糖酵解系列 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 （Phosphoenolpyruvate carboxylase, PEPC）
货号：BC2190
规格：50T

产品简介：
    磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶大量存在于细菌、藻类和高等植物中，是催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶，对三羧酸循环的运转起重要调节作用。PEPC 能够在 Mg2+存在的情况下将磷酸烯醇式丙酮酸和 CO2 催化为草酰乙酸和 HPO42-，苹果酸脱氢酶又可催化草酰乙酸和 NADH 生成苹果酸和 NAD，通过测定 340nm 下 NADH 的氧化率，即 340nm 下吸光值的下降率可计算出 PEPC 活性的大小。

试验中所需的仪器和试剂：
    紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水

产品内容：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存。（用于非哺乳动物组织或培养细胞）
100mM PMSF：7 mL×1 瓶，-20℃保存。
试剂一：液体 30 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 5 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 5 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×4 支，-20℃保存，用时每支加 1mL 双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂五：粉剂×4 支，-20℃保存，用时每支加 1mL 双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂六：原液 20ul×1 支，4℃保存；
试剂六：稀释液 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂七：粉剂×5 支，-20℃保存，用时每支加 1mL 双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂六工作液的配制：将试剂六原液：试剂六稀释液=1ul:329ul 稀释，用多少配多少。

操作步骤：

一、样品测定的准备：
(1)  细胞或组织样品的制备 ：
    对于培养的细胞： 先收集细胞到离心管内， 弃上清， 按照每 200 万细胞加入 400μL 提取液和 4uL 100mMPMSF 的比例充分匀浆或超声以破碎并裂解细胞。8000g 离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。对于哺乳动物组织：按每 100mg 组织加入 900μL 生理盐水和 9uL 100mM PMSF 的比例进行冰浴匀浆。
    8000g 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。
    对于非哺乳动物组织：按每 100mg 组织加入 900μL 提取液和 9uL 100mM PMSF 的比例进冰浴行匀浆。
    8000g 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。
（2）血清（浆）样品：直接检测。

二、测定操作表：

将上述试剂按顺序加入 1 cm 光径的 1 mL 石英比色皿中，加样本的同时开始计时，混匀后在 25℃，340nm 波长下记录初始吸光度 A1，和反应 5 分钟后的吸光度 A2。计算 ΔA=A1-A2

注意事项：

1. 粗酶液的提取必须在 0℃ - 4℃中操做完成，以防止酶变性失活。
2. 测定过程中样本﹑所有试剂和粗酶液必须在冰上放置。
3. 对照管只需要做一次。

PEPC  活力单位的计算：
1 、血清（浆）PEPC  活力的计算:
单位定义：25℃，pH8.0 条件下，每 L 血清（浆）在反应体系中每分钟消耗 1 μmol/L 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
计算公式：
血清（浆）中PEPC（U/L）=〔（ΔA 测定 -ΔA 对照 ）/6.22〕×〔1/（反应时间×比色皿光径）〕×（V总/V粗酶液）×1000 =（ΔA 测定 -ΔA 对照 ）×1624
2 、组织中 PEPC  活力的计算:
单位定义： 25℃，pH8.0 条件下，每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟消耗 1 μmol/L 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
计算公式：
组织中PEPC活力 （U/mg prot）=〔（ΔA 测定 -ΔA 对照 ）/6.22〕×〔1/（反应时间×比色皿光径）〕×（V总/V粗酶液）/测试蛋白浓度 =（ΔA 测定 -ΔA 对照 ）×1.624/测试蛋白浓度6.22 : NADH 的 mM 消光系数
比色皿光径： 1 cm
反应时间：   5 min
V 总：       1010μL
V 粗酶液：   20μL
测试蛋白浓度：mg/mL

糖酵解系列 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 （Phosphoenolpyruvate carboxylase, PEPC）订购说明：
1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。

, PEPC）运输说明：
1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝专用的箱子，然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝专用的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
3、常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速GX的快递保证产品快速送达您的手中。