Human Insulin ELISA Kit

Human Insulin ELISA Kit人胰岛素(Insulin)酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒使用说明书

货号: HM10073

 本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中胰岛素(Insulin)的含量。

• 有效期：6个月
• 保存条件：2-8℃

 使用目的

本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中胰岛素(Insulin)的含量。

Human Insulin ELISA Kit实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胰岛素(Insulin)水平。用纯化的人胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人胰岛素(Insulin)浓度。

注意事项

• 本试剂盒仅用于科研，不得用于医学诊断。
• 使用试剂盒前，请仔细阅读说明书，以试剂盒内的说明书为准，请务必理解说明书内容。
• 酶标包被板属于可拆型，开封后如未用完，板条应装入铝箔袋密封并2-8°C保存。
• 加样样本和试剂应尽快完成。
• 避免实验过程中酶标板干燥；清洗后尽快加试剂。
• 实验开始，所有试剂应平衡到室温 (21-26°C) 后方可进行。温度会影响吸光度值，但不影响样本值。
• 切忌用口加样，以免试剂和样本粘到皮肤和粘膜上。
• 不要在处理样本或试剂的区域抽烟、吃东西、喝酒或化妆。
• 操作时带一次性手套，微生物的污染会影响实验结果的正确性。
• 操作应按照国家规定的安全条列进行。
• 过期的试剂盒切勿再使用。
• TMB 底物对皮肤有刺激性，不慎入眼，立即用大量水冲洗，皮肤上不慎接触到也应立即用肥皂，并用大量的水冲洗。试验中被污染的物品在下次使用前应尽快清洗。

试剂盒组成

1.说明书                             1份

2.封板膜                             2张

3.酶标包被板                       12孔×8条

4.标准  256 mU/L                 0.6ml×1 瓶

5.标准品稀释液                     2ml×1 瓶

6.生物素标记的抗Insulin抗体        1.5ml×1瓶

7.显色剂A液                       6ml×1瓶

8.显色剂B液                       6ml×1瓶

9.终止液                         6ml×1瓶

10.酶标试剂                      6ml×1瓶

11.30倍浓缩洗涤液               20ml×1瓶

需要而未提供的试剂和器材

• 吸光度值在450nm波长下检测的酶标仪。
• 1-2ml的加样器。
• 100 ml和1L的量筒。
• 吸水纸。
• 37°C 恒温箱。
• 蒸馏水或去离子水。
• 数据分析和绘图软件，图纸。
• 标准和样品稀释的试管。

储存条件

1. 有效期内的试剂如开封后未用完，请2-8°C 保存。
2. 过期的试剂请不要用，打开后的试剂2-8°C 保存。
3. 酶标包被板必须2-8°C 保存，如有未用完的酶标包被板，打开的铝箔袋须密封并2-8°C 保存。
4. 开封后的试剂盒2-8°C只能保存8周。

试剂准备

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

样本处理及要求

1. 血清-用采血管收集血液，室温血液自然凝固30分钟，1000 xg离心15分钟左右，收集上清，尽早进行实验，或者分装后-20°C 或 -80°C 保存。
2. 血浆-收集好的血浆根据要求选择EDTA或者肝素作为抗凝剂，2-8°C 1000 xg离心15分钟左右，30分钟内收集好，-20°C 或 -80°C 保存，避免反复冻融。
3. 细胞上清及相关液体-收集好的样本离心后应尽快实验，或者分装后-20°C 或 -80°C 保存，避免反复冻融。

操作步骤

1. 注意事项
   • 所有试剂和样本使用前必须在室温下平衡，混匀试剂时不应起泡沫。
   • 一旦实验开始，各操作步骤都应尽快完成。
   • 避免重复使用手中的吸头和试管，以免交叉污染。
   • 一般情况，酶的反应与时间和温度成正比。
     1. 操作步骤

1. 标准品的稀释：准备小试管6只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0号标准品。稀释后各管浓度分别是：128 mU/L,64 mU/L,32 mU/L,16 mU/L,8.0 mU/L,0 mU/L。

在酶标包被板上设标准品孔，依次加入不同浓度的标准品50ul（建议每个浓度做2个平行孔）。

1. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品、酶标试剂及生物素标记的抗Insulin抗体，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl，然后再加生物素标记的抗Insulin抗体10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6. 温育：操作同3。
7. 洗涤：操作同5。
8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行

实验结果计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。