收到细胞后,在倒置显微镜下观察细胞生长状态: 如果没长满,将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培养液,继续培养。 如果细胞已经长满(约80%-90%)则传代后继续培养。 贴壁细胞传代方法: 1 弃去培养基,用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。 2 加1ml 0.25%的胰酶(含0.02%EDTA),让胰酶与大部分细胞接触后放入37℃培养箱内,随时观察细胞状态变化,待细胞大部分变圆后加完全培养基终止消化。 悬浮细胞传代方法:可以直接传代也可以离心法传代。 1 直接传代是让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清吸掉1/2-2/3,吹打细胞形成细胞悬液后,分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。 2离心法传代是将细胞连同培养液一并转移到离心管内, 1000rpm,5分钟,去除上清,加新的培养液到离心管内,吹打细胞形成细胞悬液后,分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。 一般没有特殊说明,细胞一般是一传二。 |