irvine代理 irvine品Pai代理（斯信生物2015）

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　　产品信息：irvine公司主要产品：

　　irvine推荐使用:

　　含组氨酸标签的蛋白的诱导表达及纯化

　　一. 用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因

　　所需特殊试剂：1M IPTG

　　1. 将目的基因与IPTG诱导表达载体连接，构成重组质粒并转化相应的表达用的大肠杆菌。将转化体铺于含相应抗生素的LB平板，37℃培养过液。通过酶切序列分析等筛选带有插入片段的转化体。

　　2. 分别挑取对照菌和重组菌1个菌落，接种于1ml含有相应抗生素的LB培养液中，37℃通气培养过液。

　　3. 取100微升过液培养物接种于5ml含有相应抗生素的LB培养液中(各10份)，适当的温度(20-37℃)震荡培养4小时，至对数中期(A550=0.1-1.0)。

　　4. 对照菌和重组菌各取1ml未经诱导的培养物于离心管中，剩余培养物中加入IPTG至终浓度分别为0.5，1.0，1.5，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0mM相同的温度继续通气培养。

　　5. 在诱导的1，2，3，4，5个小时取1ml样品于Ep管中。

　　细菌的生长速率严重影响外源蛋白的表达，因此必须对接种菌量，诱导前细菌生长时间和诱导后细菌密度进行控制。生长过度或过速会加重细菌合成系统的负担，导致包涵体的形成。生长温度可能是影响大肠杆菌高度表达目的蛋白的Z重要因素。低温培养能在一定程度上YZ包涵体的形成。IPTG的浓度对表达水平的影响也非常大。所以通过试验确定Z佳的培养条件是很必要的。

　　6. 将所有样本室温Z高速度离心1分钟，弃上清，沉淀重悬于100微升1×SDS蛋白上样缓冲液中，100℃加热5分钟，室温Z高速度离心1分钟，取15微升样品上样于SDS聚丙烯酰胺凝胶，用SDS-PAGE观察表达产物条带，从而确定优化的培养条件。

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