精子核蛋白染色试剂盒（苯胺蓝染色法）

【精子核蛋白染色试剂盒（苯胺蓝染色法）品    名】

精子权威五联检：精子核蛋白染色试剂盒（苯胺蓝染色法）

【研发依据】

正常情况下，与精核DNA结合的碱性蛋白（核蛋白）将经历从组蛋白到鱼精蛋白的自然成熟过程，这种成熟后的鱼精蛋白对精子基因（DNA）具有特殊保护作用。

组蛋白被鱼精蛋白逐渐取代的过程，称之为精子核蛋白组型转换，这种组型转换具有重要的生理意义。但当核蛋白组型转换异常可引起男性不育或胚胎早期夭折流产，其机理为：①精子DNA不稳定且易受损伤而难以受孕；②一旦受精，由于核蛋白组型异常，精子核不能正常解聚，从而影响了雌雄原核的融合；③胚胎不能正常发育，造成胚胎夭折而流产。

【预期用途】

主要用于成年男性精子核蛋白的染色，以此评估成年男性精子成熟比例，可评价男性生育功能。

【试剂特点】无须特殊仪器，简单、快速、准确。

【检验原理】

成熟精子的核蛋白成份为鱼精蛋白，富含精氨酸和胱氨酸残基；不成熟精子的核蛋白成份为组蛋白，富含赖氨酸残基。酸性条件下，苯胺蓝与赖氨酸残基结合生成紫蓝色化合物，从而指示不成熟核蛋白的存在，而核蛋白成熟的精子则染成红色。

【组成成份】

试剂主要由苯胺蓝、氧杂蒽、冰醋酸、磷酸盐缓冲液等配制而成。

【样本要求】液化后的新鲜精液标本

【操作方法】

1．试剂的准备

1）洗涤工作液的配制：A液（10×浓缩洗涤液）以蒸馏水10倍稀释，4℃保存备用；

2）洗脱工作液的配制：D液（10×浓缩洗脱液）以蒸馏水10倍稀释，4℃保存备用。

2．样本准备

1）新鲜精液标本置于37℃恒温水浴箱中完全液化。

2）精子的洗涤及稀释，方法如下： ①在Eppendorf管中加入0.2—0.5ml的精液和洗涤工作液1ml，以一次性吸管反复吹打精子数次后，2000转离心5min，弃去上清液，保留管底精子沉淀团； ②在Eppendorf管中加入洗涤工作液1.5ml，以一次性吸管反复吹打精子数次后，2000转离心5min，弃去上清液，保留管底精子沉淀团； ③再次重复②的操作，离心结束后，弃去上清液。④在Eppendorf管中加入洗涤工作液约0.1—0.2ml，混合精子悬液。

3．检测步骤

1）取上述已制备好的精子悬液15μl，均匀涂布于防脱载玻片上，自然干燥。

2）在涂有待测精子的涂片区内，滴加B液（固定液）2—3滴，室温反应2min。

3）以流水轻轻冲去载玻片上的试剂（注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子），甩去多余水份（注意防止涂片干燥）。

4）在涂有待测精子的涂片区内，滴加C液（染色液）2—4滴，室温反应5min。

5）以流水轻轻冲去载玻片上的试剂（注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子），并甩去多余水份（注意防止涂片干燥）。

6）将载玻片竖直插入已盛有洗脱工作液的反应池中，使待测标本涂片区完全浸没于洗脱工作液中，室温反应5min。

7）以流水轻轻冲去载玻片上的试剂（注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子），并甩去多余水份（注意防止涂片干燥）。

8）在涂片区内滴加E液（复染液）2—4滴，室温反应5min。

9）以流水轻轻冲去载玻片上的试剂（注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子），迅速吹干玻片。（如果需要长久保存该涂片样本，可选择完成以下脱水步骤：分别将组织片依次置于70%、90%和乙醇中各2min，晾干。）

10）镜检。

【染色结果】

核蛋白不成熟的精子染色呈紫蓝色或紫色，核蛋白成熟的精子染色呈红色。

【参考值】 DFI（单链DNA精子）＜10%为正常；当DFI＞25%时，受精率＜20%。

【注意事项】

1．受试者应按照WHO技术规范采集精液标本。

2．若精液标本粘稠度高或液化不完全，可导致检测结果非特异性假阳性。需要预先降低精液粘度或促进精液完全液化后，才能用于检测。

3. 精子密度过高可能导致脱色不均匀，从而对检测结果产生不良影响；精子密度过低则不会影响检测结果；涂片时应避免涂布过于稠密。

4. 精子洗涤不充分可影响显微镜观察结果。

5. 染紫蓝色精子为核蛋白不成熟精子，染红色精子为核蛋白成熟的精子。由于精子核蛋白存在组蛋白-鱼精蛋白的过渡期，因此此类精子头部呈淡蓝色或紫色；精子头部局部染淡蓝色或紫色、顶体膜边缘染紫蓝色，均是精子不够成熟的表现。

6. 镜下观察结果时，不要在精子堆集分布的区域计数，应选择精子散在分布的区域进行计数。

7. 受检者所有样品均应视为潜在的传染源，检测完毕的样本、试剂均须作为YL废物处理，避免污染环境。

8．精子核蛋白染色试剂盒为体外诊断试剂，检测结果仅供临床参考，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其它实验室检查及ZL反应等情况结合考虑。

【基本信息】

产品注册证号：闽明食药监械（准）字2013第1400022号

执行产品标准：YZB/闽明0034-2013

YL器械生产企业许可证号：闽食药管械生产许第20110297号

规  格：20人份/盒、40人份/盒

存储条件及有效期：试剂盒于2-8℃避光保存，有效期12个月。

【附录】

影响精子受精或男性不育的因素

1.精子死亡率过高

2.精子畸形率过高

3.精子成熟率过低

4.精子染色体异常

5.精子数量过少

6.精子活动力过低

7.精子液化能力过低

三明市和众生物技术有限公司——生殖医学检测试剂盒系列

1、精子DNA检测试剂盒

2、精子DNA碎片检测试剂盒

3、精子活性检测试剂盒

4、精子形态学检测试剂盒

5、精子核蛋白检测试剂盒

五项联合检测，权威诊断分析精子的受精及生育能力，无须仪器，简单、快速、准确，不孕不育科的Z佳诊断方案。