Biotium细胞凋亡荧光检测试剂盒

Biotium细胞凋亡荧光检测试剂盒（Apoptosis Fluorometric Assay Kit）

细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。

Annexin V是一种分子量为35.8KD的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力特异结合。标记荧光物质的Annexin V结合到凋亡细胞后，通过荧光颜色可以区分出凋亡细胞与正常细胞。

Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，与DNA断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，Z终导致细胞凋亡。Caspase-3荧光光度法检测试剂盒就是根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽(Ac-DEVD)2-R110，其中DEVD是一个四肽化合物，在共价偶联时，R110不能被激发荧光，在连续两个反应步骤后，短肽被完全水解后释放出R110。水解的*步产生一个单肽中间体Ac-DEVD-R110，此物与吸收和发射波长与R110 (ex\em= 496/520 nm)相似，但是只有R110激发荧光的10％。水解的第二步释放的自由的R110才能被激发发射荧光。根据释放的R110荧光强度的大小，可以测定caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。试剂盒中的Ac-DEVD-CHO, 是caspase-3的YZ剂，作为整个反应的负调控物。试剂盒中的 R110 用来做标准曲线，用来定量caspase-3的活力。

CD95/Fas和TNF引发细胞凋亡过程中，一系列caspase级联式地活化，其中caspase-8的活化是其*步反应。快速检测哺乳动物细胞或者组织裂解液中caspase-8活性，常用的办法将caspase-8序列特异性的多肽偶联至发色基团(Ac-IETD)2-R110，当该底物被caspase-8剪切后，R110即游离出来。可以测定荧光的发射强度，也可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，来考察caspase-8的活化程度。试剂盒中也有Ac-IETD-CHO，R110，Cell lysis buffer，Assay buffer。

货号30008-2试剂盒内容物：

• 100ml,Cell Lysis Buffer
• 4*1.25ml Assay Buffer
• 500ul 酶底物(Ac-DEVD)2-R110（1mM）
• 20ul 酶YZ剂Ac-DEVD-CHO（5mM）
• 1ml R110（80uM）

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Biotium细胞凋亡荧光检测试剂盒谷光苷肽凋亡检测试剂盒（MCB Glutathione Detection Kit）

线粒体相关细胞凋亡事件的早期，细胞质中谷胱甘肽的流失开始发生。通过荧光染料monochlorobimane(MCB)体外检测凋亡细胞细胞质中谷光苷肽的减少来检测凋亡早期细胞内氧化还原状态的变化。当细胞内GSH的排除非常活跃时，使细胞色素C（三羧酸循环中的重要组分）释放，启动caspase的级联反应。

MCB (Monochlorobimane)是一种荧光染料，在GST的作用下，它可以与谷胱甘肽结合并会发出蓝色荧光（激发波长：380nm，发射波长：461nm）。

试剂盒包括：

• 25ml细胞裂解液
• 500ulMCB（10mM）
• 200ulGST试剂（50U/ml）

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细胞凋亡/坏死定量检测试剂盒（Apoptosis & Necrosis Quantification Kit）

细胞凋亡和坏死是细胞死亡的两个阶段。细胞凋亡在细胞内是自主的，由基因调控的死亡方式。细胞凋亡的变化发生在细胞膜磷脂部分，磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）开始从胞膜内侧翻转到外侧进行细胞吞噬识别，抗凝剂Annexin V是一种分子量为35.8KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（PS）高亲和力特异结合，Annexin V标记有FITC (λabs/λem= 492/ 514 nm), 在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，区分出凋亡细胞与正常细胞。

细胞坏死指细胞经受一定的环境胁迫（如缺氧等等）被动死亡的过程。这一过程伴随胞内细胞器和胞膜完整性的同时丧失，细胞内容物膨胀并爆裂到细胞周围的环境中。溴乙啡锭二聚体（Ethidium homodimer，简写EtD-III，或者EthD-1，EtDi）是一种核酸荧光探针，但渗透不进活细胞或者凋亡的细胞，仅仅可以染色坏死的细胞核，显红色荧光(λabs/λem(with DNA) = 528/617 nm)，EthD-III是经常用到的PI或者ethidium homodimer I的新替代产品，它优异的DNA附着性能、很强的荧光使得检测更灵敏。上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，凋亡细胞、坏死细胞可以很好的区分。

如果在试剂盒中再加入膜渗透型蓝色DNA荧光染料Hoechst 33342 (λabs/λem(with DNA) = 350/461nm)，同时可以区分出正常健康的细胞来。

货号30017试剂盒内容物：

• FITC-Annexin V ：1支，250 uL ,in TE Buffer
• Ethidium homodimer III ：1支，250 uL ，200uM，in PBS
• 5X binding buffer ：1瓶，10ml
• 货号30018试剂盒内容物：
• FITC-Annexin V ：1支，250 uL ,in TE Buffer
• Ethidium homodimer III ：1支，250 uL ，200uM，in PBS
• Hoechst 33342：1支250ul，50ug/ml in PBS
• 5X binding buffer ：1瓶，10ml

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