替米考星酶联免疫试剂盒

一、药物概述及检测原理

本试剂盒利用替米考星抗体与替米考星可产生特异性结合的性质，先在酶标板上预包被抗原，再加入标准品（样本）和替米考星抗体，样本或标准品中的替米考星药物与固定在酶标板上的抗原竞争替米考星抗体，Z后加入底物催化显色。此时显色深度与标准品（样本）中替米考星药物的含量成反比。

二、试剂盒内包含组分：

1. 标准品工作液：0 ppb、0.5 ppb、1.5 ppb、4.5 ppb、13.5 ppb,1 mL/瓶。
2. 96孔酶标板：1块
3. 替米考星抗体工作液：1瓶（6mL/瓶）
4. 酶标Ⅱ抗工作液：1瓶（6 mL/瓶）
5. 20×浓缩洗涤液：1瓶（30 mL/瓶）
6. 10x浓缩复溶液：1瓶（10 mL/瓶）
7. 底物A液：1瓶（6 mL/瓶）
8. 底物B液：1瓶（6 mL/瓶）
9. 终止液：1瓶（6mL）
10. 说明书
11. 盖板膜
12. 自封袋
13. 合格证

 三、用户需要自备的设备和试剂

仪器：

1. 酶标仪（检测波长450 nm、630 nm）
2. 电子天平（精度：0.01 g）
3. 离心机（4000 g及以上）
4. 生化培养箱（可调25℃）
5. 摇床
6. 旋涡振荡器
7. 氮吹仪
8. 微量移液器：（20μl-200μl、100μl-1000μl各一支、30-300ul八道排枪）
9. 计时器

试剂：

1. 无水碳酸钠
2. 碳酸氢钠
3. 乙酸乙酯
4. 正己烷
5. 去离子水

 四、检测步骤

• 准备：将要使用的酶标板条插入酶标板架上，并记录各标准品和样品的位置，为减小检测值波动建议做双孔平行实验（每个样本/标准品点两孔），未使用的酶标板条用自封袋密封后，保存于2-8℃环境中以防变质；
• 加样：向对应微孔中加入标准品工作液/样品溶液50 μL，向每孔中加入50 μL酶标二抗工作液；再向每孔中加入50 μL抗体工作液；
• 孵育：轻轻振荡酶标板10 s，使孔内液体充分混匀后，盖好盖板膜于25℃避光反应20 min；
• 洗涤：取出酶标板后小心揭开盖板膜，倒出板孔中液体后，在每孔加 250 μL洗涤工作液，浸泡15-30s后倒掉洗涤工作液，然后再加入洗涤工作液重复洗涤3~4次后，将酶标板倒置于吸水纸上，用力拍干；
• 显色：在每孔中加入100 μL 底物A和底物B的混合液（注：底物A液、底物B液必须按体积1:1充分混合，混合液在10 min内使用，切不可使用金属容器盛装、搅拌试剂以免底物变质失效）；
• 孵育：轻轻振荡酶标板10 s，使孔内液体充分混匀后，盖好盖板膜于25℃避光反应10 min；
• 终止：在反应后的微孔中加入终止液50μL/孔，底物液由蓝变黄表明终止成功。
• 读数：终止后的酶标板应在5 min内用酶标仪读数，建议使用450 nm、630 nm双波长读取酶标板吸光度值。
• 五、试剂盒参数 
• 试剂盒灵敏度：0.5 ppb；
• 标准曲线范围：0.5 ppb-13.5 ppb；
• 板内变异系数：<5%；
• 板间变异系数：<15%；
• B0吸光度Z佳值：>0.8；
• 回收率：90%±30%
• 样品Z低检测限：

　组织方法一猪肉、鸡肉…………………约5ppb

  组织方法二猪肉、鸡肉…………………约1ppb

  蜂蜜……………………………………约5ppb

六、试剂盒贮存条件

• 试剂盒Z佳贮存温度为2-8℃，切勿冻存。
• 未使用完的酶标板条须密封保存2-8℃的环境中。