BC0075 谷氨酸合成酶（GOGAT）活性检测试剂盒

谷氨酸合成酶(GOGAT)活性检测试剂盒

粗酶液提取：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤： 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定（1）在试剂二中加入 18mL 试剂一充分溶解混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用；（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL样本和180μL试剂二，混匀，立即记录340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。

谷氨酸合成酶(GOGAT)活性检测试剂盒

GOGAT 活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。 GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(V 样×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 GOGAT（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 GOGAT（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.642×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。 GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 GOGAT（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 GOGAT（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=1.286×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

谷氨酸合成酶(GOGAT)活性检测试剂盒

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；