禽脑脊髓炎检测试剂盒说明书

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 禽脑脊髓炎抗体检测试剂盒使用说明书

【用途】
用来检测鸡血清中的禽脑脊髓炎病毒（AEV）抗体

【试验原理】
禽脑脊髓炎，也称雏鸡传染性颤搐病，主要通过鸡蛋传播，感染鸡和易感鸡或成年禽之间亦可发生水平传播。青年鸡（1~4周龄）主要临床表现为共济失调、麻痹或头颈快速震颤等症状，成年鸡表现为产蛋能力下降。血清中的病毒抗体可通过酶联免疫的方法检测。血清中的AEV抗体水平及整个鸡群的免疫状况可用ELISA方法进行监测。
将灭活的AEV抗原包被在微孔板上，加入稀释后的血清并孵育，血清中的抗AEV抗体将与包被在微孔板上的AEV结合，形成AEV抗原-抗体复合物。然后洗掉未结合的物质，加碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG的酶标结合物至微孔板中，酶标物将与AEV抗原-抗体复合物结合。孵育后洗掉未结合的结合物，然后加入底物溶液。底物与碱性磷酸酶反应并生成一种有颜色的产物，Z后终止反应，将颜色固定。颜色的深浅可用酶标仪（405-410nm）测定。

【一个微孔板所需的试剂的量】

Sp ×（100）＝ ELISA Unit （EU）              阳性对照值设为100 EU

【结果判定及EU单位说明】
AEV ELISA 值                        说明
小于15EUs                            AEV抗体为阴性
15-25 EUs                             AEV抗体为弱阳性，应被认为经过免疫或暴露于AEV，油乳状疫苗也可能引起非特异性低水平抗体。
25-75 EUs                             AEV抗体适度阳性
＞75 EUs                              AEV抗体强阳性

【操作步骤】
1. 将试剂回温至室温，通过颠倒和涡旋将试剂混匀。
2. 将1份4×样品稀释液加入到含3份去离子水的容器中，充分混匀，例如，30ml 4×样品稀释液加入到90ml去离子水中。
3. 将1份20×洗涤液加入到含19份去离子水的容器中，充分混匀，例如，25ml 20×洗涤液加入到475ml去离子水中。
4. 稀释前将阳性对照、阴性对照和样品震荡均匀。
5. 阳性对照、阴性对照和样品均需要用样品稀释液稀释后使用。稀释比例为2μl ：800μl。将移液器调到100μl，反复吹打4次使之充分混匀。
6. 将稀释后的阴性对照、阳性对照分别加入微孔中，每种做两个平行，每孔100μl；将稀释后的样品100μl分别加入孔中，室温下静置30分钟。
7. 弃去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗涤液洗涤，重复洗涤2次，在洗涤过程中防止酶标板变干。
8. 每孔立即加入100μl结合物，室温静置30分钟。
9. 重复步骤7进行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物，室温静置30分钟。
11. 不要倒掉板内液体，每孔立即加入100μl终止液。
12. 用酶标仪双波读数（405nm或410nm作为主要波长，630nm或650nm为参考波长），计算结果。

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