荧光素标记鼠抗人复合前列腺特异性抗原单克隆抗体IgG

荧光素标记鼠抗人复合前列腺特异性抗原单克隆抗体IgG常用的标记蛋白质的方法有搅拌法和透析法两种。以FITC（异硫氰酸荧光素）标记为例，搅拌标记法为：先将待标记的蛋白质溶液用0.5ml／L pH9.0的碳酸盐缓冲液平衡，随后在磁力搅拌下逐滴加入FITC溶液，在室温持续搅拌4～6h后，离心，上清即为标记物。此法适用于标记体积较大，蛋白含量较高的抗体溶液。优点是标记时间短，荧光素用量少。但本法的影响因素多，若操作不当会引起较强的非特异性荧光染色。透析法适用于标记样品量少，蛋白含量低的抗体溶液。此法标记比较均匀，非特异染色也较低。方法为：先将待标记的蛋白质溶液装入透析袋中，置于含FITC （异硫氰酸荧光素）的0.01mol／L pH9.4碳酸盐缓冲液中反应过夜，以后再对PBS透析法去除游离色素。低速离心，取上清。用于标记的抗体，要求是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取IgG后再作标记。荧光素标记鼠抗人复合前列腺特异性抗原单克隆抗体IgG  荧光素标记抗体技术是指在碱性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光激发下产生黄绿色荧光，通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测，目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocynate,FITC）或罗达明（Lissamine rhodamine B200, RB200）。该技术的主要操作步骤是：将纯化的IgG抗体对PH9～9.5碳酸盐缓冲液透析过夜，透析后抗体液移入小烧杯中，称取适量IFTC，加入二甲亚砜（DMSO）（FITC～1mg/1ml DMSO），使终浓度为1mgFITC／1mlDMSO，FITC／IgG比例:如IgG浓度为1mg／ml，FITC／IgG比例约为50μgFITC／mgIgG，如IgG为5～10mg／ml，则比例为25μgFITC／ml IgG，在10ml小烧杯中先放入抗体，按上述比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中，将标记物用PBS加至2.5ml，磁力搅拌器室温下避光搅拌2h，用PD10柱（Sephadex G25柱）除去游离荧光素，先用25ml PBS淋洗G25柱，　收集PBS洗脱*个荧光素结合蛋白峰，测定F／P比值（合适的F／P值为2～4）。

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