QB-004 细胞毒性T淋巴细胞株 CTLL-2

细胞毒性T淋巴细胞株 CTLL-2

细胞描述：   
该细胞是源自C57BL/6的细胞毒性的T淋巴细胞，生长依赖IL-2。

细胞毒性T淋巴细胞株 CTLL-2增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。请按照正确的培养方法来解冻、传代，以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进行。    

质量控制：   
本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。 

培养条件：
37℃，5% CO2，pH值7.2~7.4，无菌恒温培养。

生长特性：

悬浮生长　
用途：   
本产品只提供给进一步的科研使用，不可应用于ZL等其他方面。

细胞相关操作：

细胞复苏

1. 37°C水浴预热培养基；
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；
4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞，用血小球计数板进行细胞计数，按细胞密度4-5×105/ml接种到25ml细胞培养瓶中；
5.置于37°C，5% CO2的培养箱中静置培养。

细胞传代

1.取细胞计数(详见细胞冻存)，当细胞密度达到1.0-3.0×106/ml时（Z好不要超过3.0×106cells/ml），可传代；

2.37°C水浴预热培养基；

3.在超净台中，加适量预热好的培养基到无菌摇瓶中，以细胞终密度为4-5×105/ml接种细胞（也可1000rpm，5min离心后弃上清，用预热好的培养基重悬并调整细胞密度为5.0×105/ml），25ml细胞培养瓶中；
4.置于37°C，5% CO2的培养箱中静置培养。

细胞冻存

1.细胞计数：

1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片，将盖玻片完全覆盖计数区；

2)充分混匀细胞，取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合，移液器吹吸混合均匀，用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳；

3)显微镜下，数四个计数区的总细胞数，无活性细胞染成蓝色，活细胞不被染色；

4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2；

这里10000是不变的，因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3计数池内，1cm3=1ml，将四个计数区的细胞数除以4取平均数，乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。

5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×。

注:细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。

2.当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞。

3.37°C水浴预热培养基。

4.在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm离心5min。

5.弃上清，用90%培养液 10%DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为4-6×106/ml。

6.将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。

7.将装有细胞的冻存管放入程序降温冻存盒，-20°C放1-2h后，-80°C过YE，然后快速转移到液氮中。

收到复苏好的细胞的处理方法：
1. 先从外包装盒拿出离心管，在离心管表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜；

2. 将离心管中的细胞在超净工作台内取出一部分进行细胞计数（详见细胞冻存）。

3. 如细胞密度小于3×106/ml，可直接将离心管中的细胞转移到T25瓶中，置于37°C，5% CO2的培养箱中静置培养。
4. 如细胞密度超过3×106/ml，操作步骤参照（细胞传代）