BC2510 糖代谢系列试剂盒海藻糖酶测试盒

糖代谢系列试剂盒海藻糖酶测试盒

货号：BC2510

测定意义：

     THL（EC 3.2.1.28）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供应。

测定原理：

采用3.5－二硝基水杨酸法测定THL催化海藻糖产生的还原糖的含量。还原糖与3.5－二硝基水杨酸共热生成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，由此判断THL活性的高低。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶 ，4℃保存，用时加入2.5mL试剂一，充分溶解，现配先用；

试剂三：液体30mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：液体30mL×1瓶，常温保存；

标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml蒸馏水溶解备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

样品测定的准备： 

1、细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每400万细菌或细胞加入1mL提取液充分匀浆以破碎并裂解细胞（功率20％，超声3S秒，间隔10S，重复30次）；8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。8000g ，4℃下离心10min，取上清，置冰上待测。

加样表和测定步骤（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）：

37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴，准确反应时间10min

混匀， 100℃煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），冷却后，测定540nm处测定管吸光值。计算ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管均需设立一个对照管。

根据标准管浓度和吸光度建立标准曲线，x为吸光度，y为标准品浓度（mg/mL）。

THL活力计算：

根据标准曲线计算样品中产生的还原糖量，即将ΔA（A测定管-A对照管）带入x计算出y值。

1、按照蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

THL活力（U /mg prot）＝1000× y÷÷T÷Cpr =100× y ÷Cpr 

2、按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

THL活力（U /g 鲜重）＝1000×y÷T÷(W÷V样总)=100 ×y÷W

3、按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

THL活力（U /10⁴ cell）＝1000×y÷T÷(500÷V样总)=0.2 ×y

1000：1mg/mL=1000µg/mL；T：反应时间，10min； V样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

糖代谢系列试剂盒海藻糖酶测试盒订购说明：

1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。 
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运输说明：

1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝专用的箱子，然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝专用的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
3、常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速GX的快递保证产品快速送达您的手中。