BC2550 糖代谢系列试剂盒α-葡萄糖苷酶（α-GC）测试盒 可见分光光度法

糖代谢系列试剂盒α-葡萄糖苷酶（α-GC）测试盒 可见分光光度法
货号：BC2550
规格：50管/48样
测试方法：可见分光光度法

测定意义：                          
    α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖，不仅与细胞壁的松弛或加固有关，而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。
 

测定原理：
    α-GC分解对-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GC活性。

自备用品：
    可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 400 万细菌或细胞加入 400μL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），15000g，4℃，离心 20min，取上清，置冰上待测。
2、组织的处理：称取约 0.2g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心 20min，取上清，置冰上待测。
3、标准样品的准备：取 100μL 标准液，加入到 400μL 试剂三中，得到 1μmol/ml 标准液，十倍稀释到 100nmol/ml，倍比稀释：50、25、12.5、6.25nmol/ml，稀释液用试剂二。100、50、25、12.5、6.25nmol/ml
做标准液。

α-GC 活力计算：
1、标准曲线建立：根据标准管的浓度（y）和吸光度（x），建立标准曲线。
2、根据标准曲线，将ΔA（x）带入公式计算样品产物浓度（nmol/ml）。
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 ml 体系中每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GC 活力(U/mg prot)=(y×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T=20×y÷Cpr需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织在每 ml 体系中每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。α-GC 活力(U/g 鲜重) = (y×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T=20×y÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在每 ml 体系中每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶

活力单位。
α- GC 活力(U/10 4 cell)=(y×V 反总)÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.04×y
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；V 反总：反应体系总体积，1ml；V 样：加入反应体系中样本体
积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；T：
反应时间，0.5h。

糖代谢系列试剂盒α-葡萄糖苷酶（α-GC）测试盒 可见分光光度法订购说明：

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糖代谢系列试剂盒α-葡萄糖苷酶（α-GC）测试盒 可见分光光度法运输说明：

1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝专用的箱子，然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝专用的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
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