可见分光光度法 可溶性淀粉合成酶（SSS）活性检测试剂盒

可溶性淀粉合成酶(SSS)活性检测试剂盒
货号：BC1850
规格：50管/48样/25管/24样
 

产品内容：

提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每支加入7mL试剂一。

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；

试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每支加入5mL试剂一。

试剂五：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每支加入8mL试剂一。

试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入250μL双蒸水，充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存；

试剂七：液体250μL×1支，-20℃保存；

试剂八：液体12.5μL×1瓶；每支临用前加入溶解好的4mL试剂四

反应液Ⅰ的配制：临用前在试剂二中加入7mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后加入试剂三混合溶解。

测定意义
    SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。

测定原理
    SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。

需自备的的仪器和用品
    紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液制备

    称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、在EP管中按顺序加入下列试剂

混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A₁和2min后的吸光度A₂，计算ΔA=A₂-A₁。

注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。

三、SSS活性计算

1、按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

SSS（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清) ÷T

                    =432×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

SSS活性（U/g 鲜重）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清) ÷T

=432×ΔA÷W。 

V测：测量体积，0.78mL；V反总：反应体积，0.62mL ；V提取：加入提取液体积，0.1mL；T：反应时间，2min；ε：NADPH消光系数，6.22×10^-3mL/(nmol_˙cm)；d：石英比色皿光径，1cm；V样本：加入样本的量，0.2mL；V上清：吸取上清液的量，0.45mL；Cpr：样本蛋白浓度；W：样本鲜重。

可溶性淀粉合成酶(SSS)活性检测试剂盒订购说明：

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可溶性淀粉合成酶(SSS)活性检测试剂盒运输说明：

1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝专用的箱子，然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝专用的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速GX放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
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