BC1560 谷草转氨酶（GOT）测试盒 氨基酸代谢

谷草转氨酶（GOT）测试盒 氨基酸代谢

货号：BC1560

规格：50管/24样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：GOT（ 2.6.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化可逆转氨基反应，是氨基酸代谢的重要酶。此外，GOT 在心肌细胞中含量高，临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。
测定原理：GOT 催化 α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸；丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下显棕红色；测定505nm 吸光度的变化，即可计算GOT 酶活力。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制
提取液：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 5mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：液体 5mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂三：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存；

样品测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。

测定操作表
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水调零。
2、 在 EP 管中加入下列试剂
试剂名称（μL）  测定管  对照管
待测样本  20 
试剂一 100  100
混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）预热 30min
试剂二  100  100
待测样本  20
混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）准确水浴 20min
试剂三  1000  1000
混匀，室温放置 10min，在 505nm 波长处，测各管吸光度。每个测定管需设一个对照管。

计算
1、以相对吸光值（A 测定管-A 对照管）为横坐标，相应酶活力单位（U/L）为纵坐标。作
标准曲线为：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.482
2、血清中 GOT 活力(U/L)= 0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ 为 A 测定管-A 对照管。
3、微生物、细胞或组织中 GOT 活力(U/g 蛋白)=0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待测匀浆蛋白浓度（g/L）。χ 为 A 测定管-A 对照管。

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