50次 粪便总DNA提取试剂盒（快速型）

Fecal Total DNA Extraction Kit

 粪便总DNA提取试剂盒（快速型）

（适用于从各种粪便中提取总基因组DNA）

试剂盒组成

储存条件

本试剂盒在室温（15-25 ℃）下可保存一年。Buffer KR在室温下短时间稳定，长期放置建议保存在2-8 ℃。

产品特点：

　Karroten^TM Fecal Total DNA Extraction Kit采用独特的疏水膜技术，彻底去除粪便中的各种干扰物，提取高纯度的DNA。试剂盒采用了独特的缓冲系统，可从多种不同类型的粪便样中快速提取总DNA。

注意事项：

1. 实验前准备工作：详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分、研钵、研棒、药匙、1.5 ml和2 ml灭菌离心管以及37 ℃和65 ℃的温浴条件。

2. KFL1在低温时可能产生混浊或沉淀，在37-65 ℃温浴片刻即可。

3. Buffer KW*次使用前请按瓶上标签加入50 ml 70%乙醇。每次使用后，请立即拧紧盖子。

操作步骤：

1. 取一Karroten^TM Mini Column柱装在一个2 ml收集管上（已备）。加入300 μl Buffer KB平衡液至柱子内，室温13 000 rpm离心1 min，使平衡液完全流过柱子。弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。

注意：柱子不平衡，将导致DNA产率的减少。

2. 取100-500 mg 新鲜粪便样于2 ml离心管中（无需精确称量，但请勿超过2 ml离心管体积的1/3），加入600 μl Buffer KFL1，颠倒混匀2 min。室温13 000 rpm离心3 min。

注意：加入KFL1后，可适当研磨样品以提高DNA产量。

3. 将上清液转移至已平衡的吸附柱內，室温13 000 rpm离心30 s，使裂解液完全流过柱子。保留柱，弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管。

注意：1）温度太低可能造成KFL1混浊或沉淀，在37 ℃温浴片刻即可。 

2）如混合液体积过大，可以分成数次上柱，每次上样量不要超过700 μl。

4. 加入30 μl Buffer KR于柱的膜上，37 ℃ 放置10-15 min。

5. 加入700 μl Buffer KW，室温13 000 rpm离心30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

注意：Buffer KW在首次使用之前必须加入50 ml 70%乙醇，并置于室温下保存。

6. 重复用700 μl 70%乙醇（室温）洗涤柱子，室温13 000 rpm离心1 min。

7. 弃收集管中的滤液，将空柱子套回2 ml收集管内。室温下，Z高转速或13 000 rpm离心2 min以甩干柱子基质残余的液体。

注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于DNA中，影响后续反应。

8. 把柱子装在一个新的1.5 ml离心管上，加入50 μl的KE（可用灭菌的TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0或纯水代替，纯水可预先用NaOH调pH值至8.0），65 ℃放置5-10 min，13 000 rpm离心1 min以洗脱DNA。

注意：小心加KE到柱中吸附膜的中间部位，并确保液体将膜全部覆盖。

9. DNA可保存于4 ℃，若长时间保存，可冻存于-20 ℃。