人肺腺癌细胞（胸膜渗出液）Calu-3细胞

细胞传代   人肺腺癌细胞（胸膜渗出液）Calu-3细胞

1.   试验准备：200 ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。

2.   弃掉培养皿中的培养基，用1 ml的PBS溶液洗涤两次。

3.  用Tip头加入1 ml Trypsin液，消化1分钟（37℃，5%CO2 ）。人肺腺癌细胞（胸膜渗出液）Calu-3细胞用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。

4.   加入1 ml的含血清培养基终止反应。

5.   用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。

6.  将培养液装入离心管中，1 000 rpm离心5 min。

7.   用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。

8.  将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。

传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好Z至关重要的考验。
很多人都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。
在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。。。。，后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教。称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）xy-12492R    APOBEC1载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物1抗体
xy-12493R    APOBEC2载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物2抗体
xy-12494R    APOBEC3B载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物3B抗体
xy-12495R    APOBEC3C载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物3C抗体
xy-12496R    Apolipoprotein CI/APOC1载脂蛋白C1抗体
xy-12497R    Apolipoprotein CII/APOC2载脂蛋白C2抗体
xy-12498R    APOL1载脂蛋白L1抗体
xy-12499R    APOL4载脂蛋白L4抗体
xy-12500R    APOL5载脂蛋白L5抗体
xy-12501R    ApoM载脂蛋白M抗体
xy-12502R    Apolipoprotein O载脂蛋白O抗体
xy-12503R    APPBP1β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白1抗体
xy-12504R    Aprataxin共济失调性眼球运动功能丧失相关蛋白AOA1抗体
xy-12505R    APRG1三号染色体开放阅读框抗体
xy-12506R    APRT腺嘌呤磷酸核糖转移酶抗体
xy-12507R    phospho-AQP2 (Ser256)磷酸化水通道蛋白2抗体
xy-12508R    ARF1ADP核糖基化因子1抗体
xy-12510R    ARA9乙型肝炎病毒X相关蛋白2抗体
xy-12511R    ARFDP核糖基化因子5抗体
xy-12512R    ARFBP1ADP核糖基化因子结合蛋白抗体
xy-12513R    ARFGAP3ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白1抗体
xy-12514R    ARFRP1ADP核糖基化因子相关蛋白1
xy-12515R    Argininosuccinate Lyase琥珀酸裂解酶抗体
xy-12516R    Arginyl tRNA synthetase精氨酰tRNA合成酶抗体
xy-12517R    Argonaute 3真核翻译起始因子2C3抗体
xy-12518R    Argonaute 4真核翻译起始因子2C4抗体
xy-12519R    ARHGAP15Rho GTP酶激活蛋白15抗体
xy-12520R    ARID1B抑癌基因结合蛋白ARID1B抗体
xy-12521R    ARIH2E3连接酶蛋白ARIH2抗体
xy-12522R    ARFL1ADP核糖基化样因子1抗体
xy-12523R    ARL4ADP核糖基化因子样蛋白4抗体