人肺腺癌细胞（转染TK基因的GLC-82细胞） GLC-82-TK细胞

细胞传代   人肺腺癌细胞（转染TK基因的GLC-82细胞） GLC-82-TK细胞

1.   试验准备：200 ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。

2.   弃掉培养皿中的培养基，用1 ml的PBS溶液洗涤两次。

3.  用Tip头加入1 ml Trypsin液，消化1分钟（37℃，5%CO2 ）。人肺腺癌细胞（转染TK基因的GLC-82细胞） GLC-82-TK细胞用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。

4.   加入1 ml的含血清培养基终止反应。

5.   用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。

6.  将培养液装入离心管中，1 000 rpm离心5 min。

7.   用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。

8.  将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。

传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好Z至关重要的考验。
很多人都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。
在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。。。。，后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教。称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）xy-5857R    ADAMTS15整合素样金属蛋白酶与凝血酶15型抗体
xy-5858R    ADAMTS2整合素样金属蛋白酶与凝血酶2型抗体
xy-5859R    ADAMTS8整合素样金属蛋白酶与凝血酶8型抗体
xy-5860R    ADAMTS9整合素样金属蛋白酶与凝血酶9型抗体
xy-5919R    ARP4血管生成素样蛋白4抗体
xy-6588R    ADAMTS10整合素样金属蛋白酶与凝血酶10型抗体
xy-6587R    APEX2嘌呤嘧啶核酸内切酶2抗体
xy-0720M    AD7C-NTP神经丝蛋白抗体
xy-0105M    beta Amyloid 1-28β淀粉样肽（1-28）抗体
xy-2445R    Aurora B有丝分裂激酶B抗体
xy-3573R    Aggrecanase-2软骨蛋白聚糖抗体
xy-3574R    ADAM10去整合素样金属蛋白酶10抗体
xy-9131R    ASB9含锚蛋白重复序列-细胞因子信号YZ物盒蛋白家族9抗体
xy-9132R    ASB8含锚蛋白重复序列-细胞因子信号YZ物盒蛋白家族8抗体
xy-4731R    ABP1植物生长激素ABP1抗体
xy-9309R    ACTR1A肌动蛋白相关蛋白1抗体
xy-9518R    AHSPα红细胞分化相关因子抗体
xy-9885R    ATP1血管紧张素激活蛋白1抗体
xy-15585R    AFMAlpha清蛋白抗体
xy-11020R    AFAP1L2AFAP1L2抗体
xy-13624R    AHNAK神经细胞分化相关蛋白AHNAK抗体
xy-13713R    AJAP1粘合连接相关蛋白1抗体
xy-13736R    ADAM13去整合素样金属蛋白酶13抗体
xy-10219R    Agrin聚集蛋白抗体
xy-12480R    AP2 alpha + beta转录因子AP2α+β抗体
xy-12481R    phospho-APC (Ser2054)磷酸化腺瘤样息肉抗体
xy-12482R    phospho-APC1 (Ser688)磷酸化细胞周期末期促进复合蛋白APC1抗体
xy-12483R    APC10细胞周期后期促进蛋白亚基10抗体
xy-12484R    APC11细胞周期后期促进蛋白亚基11抗体
xy-12485R    APC2腺瘤性结肠息肉病蛋白2抗体
xy-12486R    phospho-APC6 (Thr580)磷酸化细胞分裂周期蛋白16抗体
xy-12489R    APLFDNA修复酶相互作用蛋白抗体
xy-12490R    APMAP脂肪细胞膜相关蛋白抗体
xy-12491R    APOA1BP/AI-BP载脂蛋白A1结合蛋白抗体抗体