人结肠癌细胞株 HT29细胞

细胞传代   人结肠癌细胞株 HT29细胞

1.   试验准备：200 ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。

2.   弃掉培养皿中的培养基，用1 ml的PBS溶液洗涤两次。

3.  用Tip头加入1 ml Trypsin液，消化1分钟（37℃，5%CO2 ）。人结肠癌细胞株 HT29细胞用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。

4.   加入1 ml的含血清培养基终止反应。

5.   用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。

6.  将培养液装入离心管中，1 000 rpm离心5 min。

7.   用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。

8.  将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。

传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好Z至关重要的考验。
很多人都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。
在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。。。。，后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教。称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）xy-4901R    Annexin A7膜粘连蛋白7抗体
xy-9823R    C3orf153号染色体开放阅读框15抗体
xy-6336R    APOB48R载脂蛋白B受体抗体
xy-6332R    ABCA2三磷酸腺苷结合盒转运蛋白2抗体
xy-6333R    ApoB 载脂蛋白B抗体
xy-6335R    ALOX15B花生四烯酸15脂氧合酶2抗体
xy-6338R    APOC4载脂蛋白C4抗体
xy-6337R    ARH低密度脂蛋白受体衔接蛋白抗体
xy-7550R    AUP1原始广泛存在蛋白1抗体
xy-9398R    ANKRD37锚蛋白重复结构域蛋白37抗体
xy-7588R    A4GALTα1,4-半乳糖基转移酶1
xy-7642R    AGTRAP血管紧张素Ⅱ受体相关蛋白抗体
xy-7669R    AX2R膜粘连蛋白2受体抗体
xy-0203R    ACEI血管紧张素1转换酶YZ剂抗体
xy-1229R    AATF拮抗凋亡转录因子抗体
xy-0094R    AACT-Alpha1α-1抗胰糜蛋白酶抗体
xy-0096R    alpha 1 Antitrypsinα-1抗胰蛋白酶抗体
xy-1224R    ABCB6ATP结合蛋白家族6抗体
xy-1231R    ABCG1三磷酸腺苷结合盒亚家族G1抗体
xy-0611R    Adiponectin receptor 2脂联素受体2抗体
xy-9741R    ANGEL1ANGEL1蛋白抗体
xy-9742R    ANGEL2ANGEL2蛋白抗体
xy-9743R    ANKLE2ANKLE2蛋白抗体
xy-9744R    ANKMY1睾丸特异性锚样蛋白1抗体
xy-9745R    ANKRD13B锚蛋白重复结构域蛋白13B抗体
xy-9746R    ANKRD20A1锚蛋白重复结构域蛋白20A1抗体
xy-9747R    ANKRD20A3锚蛋白重复结构域蛋白20A3抗体
xy-9748R    ANKRD22锚蛋白重复结构域蛋白22抗体
xy-9751R    ANKRD50锚蛋白重复结构域蛋白50抗体
xy-9753R    ATP6V1G2氢离子转运ATP合成酶6G抗体
xy-9755R    ANKRD26锚蛋白重复结构域蛋白26抗体
xy-9756R    ANKRD26锚蛋白重复结构域蛋白26抗体
xy-0728R    ACY3丙型肝炎病毒核结合蛋白-1抗体