实验说明
雌三醇(E3)是由孕期胎盘生成的主要雌激素,游离E3通过胎盘进入母亲的血循环,在那里很快降解为葡糖苷酸和硫酸盐衍生物以便于排泄。雌三醇在母亲血液中的半衰期只有20-30分钟,因此可以方便快捷的评价Z近的胎儿状态。血浆雌三醇水平稳定地升高且在孕晚期(28-40周)升高得Z快。胎盘雌三醇的产生突然减少将导致母亲血清的游离雌三醇快速降低,测定游离雌三醇比测定血清总E3或尿中E3有许多可能的优势,游离雌三醇水平与母亲的肝肾功能无关,也不受某些抗体的影响,因此游离雌三醇更准确地反映糖尿病孕妇胎儿的结果。因为游离雌三醇不会发生任何水解,所以我们可以更快得到实验结果。
实验原理
DRG公司的雌三醇(游离的)酶免试剂盒是一种基于竞争法原理的固相酶免吸附实验(ELISA)。微孔板内包被有能结合雌三醇分子特异性抗原位点的多抗,样本中雌三醇与HRP标记的雌三醇酶联物竞争结合包被板上有限的抗体,洗板除去未结合的酶联物;
酶联物结合量与样本浓度呈反比,加入底物液后,发生颜色反应,颜色强度与样本浓度成反比
试剂盒成份
1) 包被板,
2) 标准品
3) 酶联物
4) TMB底物液
5) 终止液
6) 浓缩洗涤液(40X)
注意:根据实验需要可额外订购零标准品稀释样本
实验所需材料(但试剂盒不提供)
1) 标准移液器
2) 可在450nm处读数的酶标仪
3) 吸水纸
4) 去离子水或双蒸水
5) 半对数坐标纸或数据处理软件
贮存条件
未开启的试剂在2-8℃下贮存,在有效期内可以保持活性。不要使用过期试剂。开封的试剂必须储存于2-8℃的环境下。包被板也必须储存于2-8℃的环境下。一旦打开包装袋,必须将它小心的密封起来
试剂准备 略
操作步骤 略
结果计算
1) 计算每个标准品、质控品和病人样本的平均吸光度值。
2) 用吸光度值作为纵坐标(y),浓度值作为横坐标(x),以每个标准品的吸光度值对其相应的浓度值进行标绘,作一标准曲线。
3) 用每一样品的平均吸光度值在标准曲线上确定其相应的浓度。
4) 自动计算方法:在IFU上,它用四参数曲线已自动计算出结果。其它的归纳方法可能会得出稍微不同的结果。
5) 样品的浓度可直接从标准曲线上读取。样品浓度高于Z高标准品的必须用进行进一步 的稀释。在计算样品浓度时就应当把此稀释因子考虑进去。
正常期望值
强烈建议每个实验室都建立自己的正常和不正常值范围
1. 健康成人
以下为用德国DRG公司试剂盒检测正常健康人的相关数据
人群 | 数量 | 5%百分位(ng/mL) | 95%百分位(ng/mL) |
男性 | 42 | 0.146 | 0.573 |
女性(未怀孕) | 43 | 0.057 | 0.822 |
此结果不能作为任何ZL的*评价,还需与相关临床检查和诊断试验相结合考虑
2. 孕期参考值
孕周 | 参考范围(ng/ml) | 孕周 | 参考范围(ng/ml) | 双胎妊娠(ng/ml) |
12 | 0.3-1.0 | 22-23 | 2.7-16 | 3-18 |
13 | 0.3-11 | 24-25 | 2.9-17 | 3-20 |
14 | 1.4-1.6 | 26-27 | 3.0-18 | 4-21 |
15 | 1.0-4.4 | 28-29 | 3.2-20 | 4-22 |
16 | 1.4-6.5 | 30-31 | 3.6-22 | 5-25 |
17 | 1.5-6.6 | 32-33 | 4.6-23 | 6-39 |
18 | 1.6-8.5 | 34-35 | 5.1-25 | 7-39 |
19 | 1.9-11 | 36-37 | 7.2-29 | 9-38 |
20 | 2.1-13 | 38-39 | 7.8-37 | 13-40 |
21 | 2.6-14 | 40-42 | 8.0-39 | -- -- |
临床意义
人体体液E3的检测常被用来监测胎儿是否生长正常,特别是检测那些高危产妇。血浆E3的浓度在妊娠20周内会逐渐增加,在晚孕期会增加得更快。因为血清E3的正常与不正常范围相当宽而且不稳定,所以单独检测E3没有很大的临床意义。为了确定个体E3的趋向,我们应当经常监测病人的情况。晚孕期血清E3浓度继续较低或突然并持续降低,表明胎儿窘迫或子宫死胎的可能性很高。如果出现这种情况,应当用相应的方法检测胎儿的情况如何。血清游离E3的水平殷钢结果其它临床方法或诊断方法(羊膜穿刺和超声波)来说明其临床意义。在下列病人的血清中也可能检测到不正常的E3水平:注射了抗生素或皮质甾体类激素的病人和母体肝功能削弱的病人。