Z0020 引物合成2-OD 索莱宝自产
引物合成是通过测定引物的OD值,溶解引物,终合成引物的一个完善的过程。
目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。亚磷酰胺三酯法合成DNA的片段,具有GX、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的,合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的,相邻的核苷酸通过3′→5′磷酸二酯键连接。
引物合成特点
1.引物合成的纯度高。
2.合成的序列长。
3.合成的效果好。
引物纯化方式1.C18柱脱盐:有人称其为简易反相柱,它对DNA有特异性的吸附,可以被有机溶解洗脱,但不会被水洗脱,所以能有效地去除盐分。它不能有效去除比目的片段短的小片段。这种方法一般不会对普通PCR反应产生影响。对于需要用于测序、克隆的引物不能使用这个级别。
2.OPC纯化: OPC纯化是根据DNA保护基(DMTr基)和Cartridge柱中树脂间的亲合力作用的原理进行纯化目的DNA的片段。
3.PAGE纯:PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对DNA的片段进行分离,然后从凝胶中回收目的DNA的方法。PAGE纯化法也是一种非常有效的DNA纯化方法,纯化后的DNA纯度大于95%,对长链Oligo DNA (大于50mer)的纯化特别有效。
4.HPLC纯化:HPLC纯化是使用GX液相色谱的原理,对DNA的片段进行纯化。纯度可以大于99%。主要用于短链和修饰引物的纯化。
5引物的OD数的定量用紫外分光光度计,波长260nm,石英比色杯,光程为1厘米,测定溶液的光密度。测定时溶液的光密度好稀释到0.2-1.0之间。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后,用1ml水稀释测OD值。需要根据稀释倍数换算出母液的OD值。