羊水细胞和绒毛膜组织专用培养基使用说明书
一.产品介绍
体外的羊水细胞与绒毛膜培养是每一个细胞遗传学实验室的ZD工作,因为核型分析所需的中期metaphase染色体有赖于获得处于分裂状态下的细胞。 羊水穿刺与绒毛膜取样是现今主要的侵入性手段用于胎儿染色体异常的诊断。BIOAMF-2 是一种改良的培养基,专门用于培养原代primary culture羊水细胞与绒毛膜组织以用于产前诊断。本培养基处于冷冻状态并已添加谷氨酰胺glutamine和各种抗生素,开瓶即可使用。
注意事项和声明
1. 体外诊断用。本培养基不可用于ZL。
2. 如发现有任何沈淀物则请勿使用。
3. 使用本公司产品并不保证一定能取得任何有效的产前诊断结论。
4. 如超过瓶上的使用期限则请勿使用。
二.贮存和有效期
BIOAMF-2培养基应保存于-20℃, 有效期为18个月。
溶解后应存放于2-8℃,并于1周内使用。 存放时注意避光。
使用方法
将BIOAMF-2培养基于2-8℃溶解后上下颠倒混合均匀。
注意:本培养基为完全配方complete medium已含谷氨酰胺L-glutamine和各种抗生素, 开瓶即可使用。
三.使用范围
BIOAMF-2培养基可用于:
-- 初级羊水细胞培养
-- 传代羊水细胞培养
-- 绒毛膜细胞培养
本培养基适用于开放与封闭式培养条件。
建议每片盖玻片上用2.5ml羊水细胞。
四.操作流程仅供参考
注:所有操作均因应在无菌环境下进行
1盖玻片培养法
1. 将20ml羊水离心220g, 10分钟。
2. 小心的将上清羊水吸出,留0.5ml。
3. 加入3.5ml BIOAMF-2培养基并轻柔搅拌。
4. 将灭菌后的盖玻片(直径30mm)放在细胞培养皿(直径35mm)中,共4份。每片盖玻片加上0.5ml悬浮培养液,加盖。
5. 放入37℃、5%CO2培养箱中培养。
6. 第二天在盖玻片上加1.5ml BIOAMF-2培养基。
7. 5天后检查盖玻片上细胞生长情况。
8. 当发现细胞开始增殖后约5-7天,重新更换新鲜的BIOAMF-2培养基。
9. 当有足够的细胞时即可收取细胞
注意:建议在收取细胞前一天更换新鲜的BIOAMF-2培养基以获得Z佳效果。
2常规培养法– 开放和封闭式培养
开放式培养
1. 将20ml羊水离心220g, 10分钟。
2. 小心的将上清羊水吸出,留2ml。
3. 将细胞重新打散悬浮,并加入18ml BIOAMF-2培养基并轻柔搅拌。
4. 将悬浮细胞分成4份,在T25号瓶中每瓶放置5ml悬浮液。将瓶盖拧上(注意不要扭紧,以利气体交流)放置37℃、5%CO2培养箱中培养。
封闭式培养:将调配好之5%CO2 /95%空气通过0.2μ过滤膜后灌注到培养瓶中并持续20秒。拧紧瓶盖并放在37℃下培养。 5. 5天后观察培养结果。
五.质量控制
所有BIOAMF-2培养基均通过微生物、pH、渗透压和内毒素测试。每个批次BIOAMF-2培养基均在*的临床细胞遗传学实验室通过原代primary culture羊水细胞测试细胞增殖情况。
关于羊水细胞培养的几点总结:
1. 羊水细胞培养的失败率约在0.5%。
2. 羊水量至少≧3.2ml方可进行培养。
3. 通常取20ml羊水分成4份以增加培养成功机率,每个培养皿应在8-9天内产生约15个细胞群。
4. 羊水通常为澄清或淡黄色,如含有过多血丝或为咖啡褐色则培养失败机率升高、培养周期延长12天左右。