Caspase-3活性测定试剂盒规格_详细资料

产品信息

货号： YSRIBIO-C1336 保存条件：低温冷藏供应商：上海研生保质期：详见说明书 CAS号：详见说明书英文名： Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit 数量： 37 规格： 20T|50T|100T

实验报告：
一、Caspase-3活性测定试剂盒规格分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：Caspase-3活性测定试剂盒规格
英文名称：Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit
产品规格：20T|50T|100T
发货周期：1～3天
本试剂盒适用于测定哺乳动物组织、细胞caspase-3活性。测定原理基于Caspase-3特异水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Aspp-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA)，释放硝胺pNA。游离硝胺pNA呈黄色在405nm具有吸收峰，用普通可见光分光光度比色方法测定。根据pNA标准管吸光度OD值和标准曲线，计算来自底物肽释放的pNA浓度，得到Caspase-3水解活性。
Caspase-3是凋亡过程中Z主要的终末剪切酶，因而也是研究Z多的caspase，它激活pro-caspase-2,6,7,9等，特异水解多种凋亡关键蛋白如PARP，介导细胞核染色质固缩、凋亡小体生成、核DNA断裂。
运输及保存试剂常温运输。到达后按要求储存，1年内稳定。
所需仪器酶标仪与96孔酶标板；或可见光分光光度计配100μl容积的石英比色杯。
工作波长吸收波长405nm，如不具备也可在400～450nm范围内测定，但灵敏度略降。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或ZL，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在产品：
PSI-6130FMOC-L-苏/N-芴氧羰-L-苏/Fmoc-Thr-OH
异己酯Fmoc-L-羟脯/N-芴氧羰-L-羟脯/Fmoc-Hyp-OH
4--4-()-2-FMOC-D-丝/N-芴氧羰-D-丝/Fmoc-D-Ser-OH
2,3,6-三FMOC-L-丝/N-芴氧羰-L-丝/Fmoc-Ser-OH
4-(二溴)溴FMOC-D-脯/芴氧羰-D-脯/Fmoc-D-Pro-OH
Peptide YY porcineFMOC-D-/FMOC-D-蛋/N-芴氧羰-D-蛋/Fmoc-D-Met-OH
2--7-吲哚酰二肽/米/Phosphoramidon disodium salt
4-代酰CBZ-L-焦谷/CBZ-L-Pyroglutamic acid
3-代酰L-酪酯盐盐/L-Tyrosine ethyl ester hydrochloride
4,5-亚二氧-1,2-二N-酰-神经/唾/N-Acetyl-Neuraminic/NANA
Caspase-3活性测定试剂盒规格2Methyl5nitroimidazole25咪唑88054222
3,6,9TRIOXAUNDECANEDIOIC ACID3,6,9三噁十一二13887984
Vincristine长春新57227
NATaq酶
Copper铜标准溶7440508
TAUROCHENODEOXYCHOLIC ACID SODIUM SALT牛鹅去胆6009989
(Z)2Aminoalpha[1(tertbutoxycarbonyl)]1methylethoxyimino4thiazolacetic acid头孢他定侧链86299470
1(4methoxy3(3methoxypropoxy)phenyl)3methylbutan1one1(43(3))31919995270
Pyrrole109977
5(Chloromethyl)1,2,3trimethoxybenzene3,4,5三苄3840300
NA34
2Bromo9fluorenone2溴9芴3096568
LINOELAIDIC ACID反亚油506218
(R)()2,2,2TRIFLUORO1(9ANTHRYL)ETHANOL三19蒽53531343
TRIDODECYLAMINE三月桂102874
左旋樟脑 464482 订购|咨询规格 100mg
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甾苷（蕊花糖苷）订购|咨询规格约20mg
噁唑订购|咨询规格 100mg
拉林 61477961 订购|咨询规格 100mg
二苄啶订购|咨询规格 50mg
次订购|咨询规格 20mg
坎利订购|咨询规格 50mg
肼屈嗪订购|咨询规格 50mg
熔点温度计(220320℃) 订购|咨询规格
丹参I 订购|咨询规格 20mg
轻松订购|咨询规格 100mg
瓜订购|咨询规格 20mg
泮订购|咨询规格 100mg
胭脂红订购|咨询规格 20mg
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

温馨提示：不可用于临床ZL。

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