货号:
YSRIBIO-C1240
保存条件:
低温冷藏
供应商:
上海研生
保质期:
详见说明书
CAS号:
详见说明书
英文名:
MTT
数量:
23
规格:
250mg
培养操作步骤:
1.MTT(噻唑兰)规格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 中文名称:MTT(噻唑兰)规格
英文名称:MTT
产品规格:250mg
发货周期:1~3天
噻唑兰(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide,MTT),也称作溴化噻唑蓝四氮唑,是一种黄色染料,已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法,用来检测细胞的活力,细胞增殖以及细胞毒性分析。检测原理在于MTT是一种可接受氢离子的化合物染料,带正电荷,具有细胞膜渗透性。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT还原成为水不溶性的深蓝色MTT-甲臜结晶,而死细胞不具有此功能。甲臜结晶是不能穿透细胞膜,因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。甲臜结晶可用DMSO或者酸化的异丙醇溶解出来,酶标仪下测定570nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量与活细胞数目成正比,用以评估细胞存活状况。MTT也可用作免疫组化/细胞化学染色试剂,也可用来检测NAD。MTT被快速还原成甲臜后,能够螯合镍,铜和钴。钴螯合物可参与机体氧化系统。CAS298-93-1分子式C18H16N5SBr外观淡黄色至橙色粉末分子量414.3纯度≥98%熔点187℃溶解性溶于水,甲醇储存条件4℃
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项:
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或ZL,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在产品:
4-羟分子筛型/分子筛/钙-A型分子筛/Molecular sieves type 3--6-哒嗪载玻片/Slides glass 3--4-移器吸头/Pipette Tips 4-Boc-2-羟吗啉96孔血凝板/The blood congeals the appearance board (R)-N-Boc-2-羟吗啉熬和树脂/螯合树脂/Chelex 100 sodium form (S)-N-Boc-2-羟吗啉分子筛4A型/4A分子筛/-A型分子筛/Molecular sieves type 4A 4-苄-2-吗琳羧盐盐分子筛3A型/3A分子筛/型KA分子筛/-A型分子筛/Molecular sieves type 3A 2-代酰200ul无菌盒装吸头 盐沙格雷酯10ul无菌盒装吸头 4-间二1000ul盒装吸头
MTT(噻唑兰)规格盐金刚标准品 Rimantadine Hydrochloride CAS1501844 利鲁相关物质A标准品 Riluzole Related Compound A CAS461825 利鲁标准品 Riluzole CAS1744225 利福平醌标准品 Rifampin Quinone CAS13983136 利福平标准品 Rifampin CAS13292461 利福布标准品 Rifabutin CAS72559069 D核糖标准品 Ribose CAS50691 维生素B2标准品 Riboflavin (Vitamin B2) CAS83885 利巴韦林标准品 Ribavirin CAS36791045 棕榈视黄酯标准品 Retinyl Palmitate CAS间二标准品 Resorcinol CAS108463 利血平标准品 Reserpine CAS50555 瑞格列标准品 Repaglinide CAS135062021 甜菊双糖A标准品 Rebaudioside A CAS58543161 蛇根木标准品 Rauwolfia Serpentina CAS8063170 硒代蛋 进口、国产 L(+)Selenomethionine 含量BR,98%硒试剂 进口、国产 DAB 含量BR,90%锡棒 进口、国产 Tin 含量CP,98%锡箔 进口、国产 Tin 含量CP锡 进口、国产 Tin 含量CP锡 进口、国产 Tin 含量3N,0.2㎜锡 进口、国产 Sodiumstannate 含量CP,98.5%细胞分裂素 进口、国产 6BA 含量BR,9095%细胞核坚牢红 进口、国产 Nuclearfastred 含量色固细胞溶解酶 进口、国产 LysingEnzymes 含量BR,300U/mg
温馨提示:不可用于临床ZL。