细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)哪家好_详细资料

产品信息

货号： YSRIBIO-C1203 保存条件：低温冷藏供应商：上海研生保质期：详见说明书 CAS号：详见说明书英文名： Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit 数量： 27 规格： 20 rxn

培养操作步骤：
1．细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)哪家好用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)哪家好
英文名称：Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit
产品规格：20 rxn
发货周期：1～3天
AnexinV-EGFP/PI细胞凋亡检测试剂盒（AnexinV-EGFP/PIApoptosisDetectionKit）是用EGFP标记了的AnexinV作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Anexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（PropidiumIodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将AnexinV与PI联合使用时，PI则被排除在活细胞（AnexinV-/PI-）和早期凋亡细胞（AnexinV+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被EGFP和PI结合染色呈现双阳性（AnexinV+/PI+）。
产品组份
AnexinV-EGFP———————100μl
PIStainingSolution————100μl
1×BindingBuffer——————8ml
储存条件4℃，有效期一年。
实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或ZL，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在产品：
异酸正酯头孢苄/头孢菌素Ⅳ/先锋霉素Ⅳ/甘头孢菌素/甘孢霉素/头孢苄一水合物/(6R,7R)-3-基-7-(R)-2-基-2-酰基-8-氧-5-杂-1-双环4.2.0辛-2-烯-2-酸/Cephalexin monohydrate
异酸香茅酯细胞松弛素B/Cytochalasin B
二基烯酸二醇酯地塞米松/去化可的松/美松/9--11,17,21-三羟基-16-基(11b,16a)-孕甾-1,4-二烯-3,20-二/Dexamethasone
2-(二氧基)酸红霉素/艾狄密新/红丝菌素/Erythromycin
3--5-基-4-基啶利福平/利发霉素/利福霉素/力复平/利米定/3-(4-基-1-嗪基)亚基基-利福霉素/Rifampicin
3-溴-5-基-4-啶利巴韦林/1-β-D-核糖基-1H-1,2,4,-三唑-3-羧酰/1-β-D核糖-1,2,4-三唑-3-羟酰/病毒唑/三唑核苷/三唑核苷/RTCA
5-二氧基-2-巯基-1H-并咪唑盐酸前黄素/Proflavine hydrochloride
5-溴-2,3-二啶氧嗪酸/1,4,5,6-四-4,6-二氧-1,3,5-三嗪-2-羧酸/草酰/4,6-二羟基-1,3,5-噻嗪-2-羧酸盐/氧酸/奥替拉西/Potassium oxonate
2-基-5-基嗪妥因/呋妥因/妥因/1-(5--2-亚基)基内酰脲/1-(5--2-基)亚基基-2,4-咪唑二/妥英/坦啶/咀啶/Nitrofurantoin
5-溴噻吩-2-酰肼格尔德霉素/Geldanamycin
细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP/PI)哪家好左沙盐盐相关物质A标准品规格30mg
左沙盐盐相关物质D标准品规格30mg
左旋状标准品(峰值定性用) 规格15mg
亚油酯酰聚甘油酯标准品规格100mg Linoleoyl Polyoxylglycerides
匹那韦系统适配物标准品规格10mg
碳头孢L异构体标准品规格25mg Loracarbef LIsomer
芴相关物质A标准品规格25mg
叶黄素标准品规格1ml Lutein
番茄红素标准品规格500mg Lycopene
锰福地相关物质A标准品规格15mg
若丹明123 进口、国产 Rhodamine123 含量BR，95%
弱金鸡进口、国产 Cinchonine 含量AR
2羧肼进口、国产 TCH 含量99.5%
噻橙进口、国产 ThiazoleOrange 含量试剂级，98%
三(2羰基基)盐盐进口、国产 TCEP 含量滴定指示剂
三(3基基) 进口、国产 Triisoamylamine 含量高，98%
三(羟基)基盐盐进口、国产 TRISHC1 含量AR
三基亚盐进口、国产 Triphenylphosphite 含量高，98%
三基树脂进口、国产 Tritylchlorideresin 含量BR
三进口、国产 Triphenylphosphine 含量BR，98%

温馨提示：不可用于临床ZL。

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