货号:
YSRIBIO-C1196
保存条件:
低温冷藏
供应商:
上海研生
保质期:
详见说明书
CAS号:
详见说明书
数量:
20
规格:
10mg
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:微核分析/遗传毒性分析荧光染料规格
英文名称:
产品规格:10mg发货周期:1~3天
微核分析/遗传毒性分析荧光染料(DAPI)是一种蓝色核酸染料,优先染dsDNA,表现为可集中结合在DNA双链的AT小沟,结合后的荧光会发生20倍增强。同时,也可以结合RNA,与DNA不同,一般认为DAPI染料结合于RNA的AU区。DAPI/RNA的复合体(500nm)有比染料与dsDNA复合体(460nm)更长的荧光波长。DAPI是一种常用的多色荧光技术中的核复染剂。他的蓝色荧光可以与绿色、红色、橙黄色探针形成鲜明对比。根据操作说明使用,染料的背景可以很低,几乎没有细胞质的背景标记。DAPI可以用在多种实验应用中,如细胞学标记、直接或间接地基于抗体的免疫荧光分析以及mRNA表达的原味杂交或者与特定的细胞结构荧光试剂进行共染。DAPI也可以用来分析多色流式细胞术中。【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的Z好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,进口来源,保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3-氧代环基基酸苄酯曲拉通x-114/二二醇单(1,1,3,3-四基基)基/聚氧烯辛/Triton x-114 2-溴并噻唑-6-羧酸酯曲拉通x-100/辛基聚氧烯/聚二醇对异辛基/异辛基聚氧烯/乳化剂OP-10/Triton x-100 (R)-N-芴氧羰基-3-基-3-基-1-醇吐温85/吐混85/聚氧烯山梨糖醇酐三油酸酯/聚氧基三油酸清凉茶醇/聚氧烯失水山梨醇三油酸酯/乳化剂T85/Tween 85 溴氧基十二基三基化铵/月桂基三基化铵/化十二基三基铵/三基十二基化铵/乳化剂1231/DTAC 烯草十四基三基化铵/肉豆蔻基三基化铵/乳化剂1431/TTAC 氧羰基-DL-色酸十四基三基溴化铵/溴化十四基三基铵/肉豆蔻基三基溴化铵/三基十四基溴化铵/N,N,N-三基-1-十四基溴化铵/TTAB 2-氧氧基酸酯十八基三基化铵/硬脂基三基化铵/乳化剂1831/STAC/OTAC 3-十八基三基溴化铵/硬脂基三基溴化铵/溴化正硬脂基三基铵/STAB 钴(III)化十六基啶/代十六基啶/十六基啶基/化鲸蜡基啶/西铵/Hexadecylpyridinium chloride 4,4'-双(4-氧基)二砜溴化十六基啶/十六基啶基溴/溴化鲸蜡基啶/溴代十六基啶/Hexadecylpyridinium bromide
微核分析/遗传毒性分析荧光染料规格蛋白质浓度测定及染色 规格HPLC≥98%;10mgScutellartlnBCA法蛋白定量试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgLuteolin 7-neohesperidosideBradford法蛋白定量试剂盒(100 mL) 规格HPLC≥98%;20mgOphiopogonin ABradford法蛋白定量试剂盒(200 mL) 规格HPLC≥98%;10mgOphiopogonin BSDS-PAGE样品预处理试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgOphiopogonin C 超敏型BCA法蛋白定量试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgOphiopogonin D福林试剂 规格HPLC≥98%;50mgLiriope muscari baily saponins C改良Lowry法蛋白定量试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgLiriopesides B还原剂兼容型BCA蛋白定量试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgRuscogenin考马斯亮蓝G-250 规格HPLC≥98%;20mg6’-O-Caffeoylerigeroside考马斯亮蓝R-250 规格HPLC≥98%;20mgEleutheroside D蛋白染色试剂盒 规格HPLC≥98%;20mgCurcumol卵白蛋白标准品,2 mg/mL 规格HPLC≥98%;20mgCurzerene牛血清γ球蛋白标准品,2 mg/mL 规格HPLC≥98%;20mgGermacr-1(10)-ene-5,8-dione牛血清白蛋白标准品,2 mg/mL 规格HPLC≥98%;20mg1,8-Dihydroxyanthraquinone
操作步骤(仅供参考):
1、微核分析/遗传毒性分析荧光染料规格贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
温馨提示:不可用于临床ZL。