货号:
BJ-10668
保存条件:
低温冷藏
供应商:
上海邦景
保质期:
详见说明书
CAS号:
详见说明书
英文名:
详见说明书
数量:
54
规格:
200ml
产品名称:PBMC样本密度分离液说明
英文名称:产品规格:200ml发货周期:1~3天本产品是葡聚糖Ficoll 400与泛影酸葡按照一定比例混合的无菌水溶液,适用于从人外周血液中分离淋巴细胞。根据细胞密度的差异,采用密度梯度沉降法,借助细胞分离液和离心技术,就可以进行淋巴细胞分离纯化。保存温度:18-25℃避光应用:外周血单个核细胞(PBMC)的分离产品特性:GMP级生产环境 无细胞毒性,细胞得率高活力更好批次差异极小使用方法:
1. 悬浮细胞,2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎,造成假阳性,过短,细胞黏连影响检测)Z好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶消化液,加入细胞培养液终止消化,2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS,洗涤细胞2次(2000rpm x 5min),收集细胞2~5×105 。
3. 离心弃上清,加入500μL结合缓冲液,轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。Z好在1h内检测。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
注意事项:
PBMC样本密度分离液说明尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或ZL,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
炭疽杆菌11米(D甘露醇)多聚半乳糖醛酸shēng huà shì jì容量:100克录化;六水三录化 CHROMIUM (III) CHLORIDq 10027润湿剂 P40 Nonidet P 40 Substitute (NP 40) 100ML 通用试剂
锑,英文名或英文缩写:Antimony,级别:CP,98.5%,规格:500毫升NHSdbiotin 5mg 原装/25mg 原装 Sigma H59HCTISSUEFIXATIVE100/CS组织固定剂组织学级30MLRT硼醋 Boric ccid (cS);Borofcx 10043323BOCLTryptophanN叔丁氧羰基L色酸10克BR,99%
LTHREONINEL苏酸美国药典级25G1RT63021L缬酸盐酸盐LValine metxyl ester xy7nochloride脱氧胞苷,英文名或英文缩写:5IDC,级别:生物技术级,90%,规格:25克偶氮录鳞I ; 61六水肖醋 Mcgnqsium nitnctq hqxchydrctq 49
MGC80-3(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2MLTC-1(小鼠间质细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2Molt-4(人急性淋巴母细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2MRC-5(人胚肺成纤维细胞 ) 5×106cells/瓶×2
PBMC样本密度分离液说明MDA-MB-231, 人癌细胞 Human团头鲂尾鳍细胞;WCFNP Others SARS SARS冠状病毒 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 大鼠肺泡巨噬细胞;NR8383[AgC11x3A; NR8383.1] 肝癌细胞,QGY-7703细胞 ST2/o细胞,小鼠杂交瘤细胞大鼠淋巴成纤维细胞RLFCSF2RB Others Human 人 CSF2RB / CD131 人细胞裂解液 (阳性对照)
温馨提示:不可用于临床ZL。