货号:
YSRIBIO-C0308
保存条件:
低温冷藏
供应商:
上海研生
保质期:
详见说明书
CAS号:
详见说明书
英文名:
NADP-malate dehydrogenase detection kit
数量:
38
规格:
50管/48样
中文名称:NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒(紫外分光光度法)价格
英文名称:NADP-malate dehydrogenase detection kit
产品规格:50管/48样
发货周期:1~3天
发货周期:1~3天测定意义:MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH, NADP-MDH主要存在于真核细胞中。测定原理:NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。需自备的仪器和用品:紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒(紫外分光光度法)价格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
以下是公司正在产品:
Enterotoxigenic E.coli(ETEC)产肠毒素性大肠杆菌O139血清型染料法荧光定量PCR试剂盒JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2; Janus kinase 2; JAK-2)5-HTR2B酸化染色质相关蛋白1-γ抗体Enterotoxigenic E.coli(ETEC)产肠毒素性大肠杆菌(大肠埃希氏菌)O139血清型PCR试剂盒5HT receptor英文名称TMEM132A酸化糖原合酶激酶-3β抗体Enterotoxigenic E.coli(ETEC)产肠毒素性大肠杆菌(大肠埃希氏菌)O139血清型探针法荧光定量PCR试剂盒5HT7 Receptor英文名称TTC21BGlu-Glu tag抗体Enterotoxigenic E.coli(ETEC)产肠毒素性大肠杆菌(大肠埃希氏菌)PCR试剂盒SCEL英文名称Tropomyosin胰高血糖素样肽-2抗体Enterotoxigenic E.coli(ETEC)产肠毒素性大肠杆菌(大肠埃希氏菌)探针法荧光定量PCR试剂盒SPAG8英文名称TEF3甘氨酸受体alpha 1/2/3型抗体BR,98%99%1gOVA-sIgG12-hydroxyeupatolideAnti-phospho-PAK1(Ser144)酸化p21激活激酶1抗体Anti-phospho-PAK1(Ser144)酸化p21激活激酶1抗体48T/96TSART1英文名称Transcription factor 25YZ型G蛋白α3抗体BR,98%99%5gMn-SOD;SOD23,6’-DisinapoylsucroseAnti-phospho-PAK2(Ser141)酸化p21激活激酶2抗体Anti-phospho-PAK2(Ser141)酸化p21激活激酶2抗体48T/96TBR,98%98%5mgchymase3’-MethoxyPuerarinAnti-Phospho-PAK2(Ser20)酸化p21激活激酶2抗体Anti-Phospho-PAK2(Ser20)酸化p21激活激酶2抗体48T/96TS100 alpha 2英文名称Tau protein促性腺激素释放激素受体抗体BR,98%98%1gIgA3'-hydroxyPuerarinAnti-phospho-PAK3(Ser139)酸化p21激活激酶3抗体Anti-phospho-PAK3(Ser139)酸化p21激活激酶3抗体48T/96TSPDYA英文名称Trk A + B + C生长因子受体结合蛋白2抗体BR,98%98%5gIgE4'-DemethylpodophyllotoxinAnti-phospho-PAK1/2/3(Thr423)酸化p21激活激酶1/2/3抗体Anti-phospho-PAK1/2/3(Thr423)酸化p21激活激酶1/2/3抗体48T/96T5HT6 Receptor英文名称TBX2GATA结合蛋白3抗体HPLC≥90%肠三叶因子检测试剂盒20mgCOPS2小鼠胚胎成骨细胞,MC3T3-E1细胞HPLC≥98%肠道病毒71型检测试剂盒100mgCOPS2 Ab
NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒(紫外分光光度法)价格Estrogen Receptorβ3-溴酚proteoglycan2-碘酚Tryptophan4-Total mercapto -SH4-氟酚Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 22--4-氯酚Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1香芹酚Estrone 1邻酰酚eumelanin3-酰酚gamma glutamyl transpeptidase 24-酰硫酚Pheomelanin3,4,5-三氟酚
注意事项:
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或ZL,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
温馨提示:不可用于临床ZL。