货号:
YSRIBIO-C0307
保存条件:
低温冷藏
供应商:
上海研生
保质期:
详见说明书
CAS号:
详见说明书
英文名:
NADP-malate dehydrogenase detection kit
数量:
37
规格:
100管/96样
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称:NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒(微量法)说明书
英文名称:NADP-malate dehydrogenase detection kit
产品规格:100管/96样
发货周期:1~3天
发货周期:1~3天测定意义:MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH, NADP-MDH主要存在于真核细胞中。测定原理:NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。需自备的仪器和用品:紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤(仅供参考):
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。【细胞冻存】
NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒(微量法)说明书待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的Z好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,进口来源,保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)肠出血性大肠杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒48T/96TELISAKitforOsterix(OSX)肠道增液Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)肠出血性大肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒48T/96TELISAKitforExoribonuclease3(ERI3)察氏培养Enteropathogenic E.coli(EPEC)肠致病性大肠杆菌PCR试剂盒48T/96TELISAKitforRAB11FamilyInteractingProtein3(RAB11FIP3)高察氏培养Enteropathogenic E.coli(EPEC)肠致病性大肠杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒48T/96TELISAKitforPhospholipaseD3(PLD3)察氏蛋白胨培养IRAK 2Smad7 + Smad6His 结构域内含酪氨酸酸酶蛋白抗体Enteropathogenic E.coli(EPEC)肠致病性大肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒IL-1RA (Interleukin-1 receptor antagonist)peptideShh多聚腺苷酸因子Clp1蛋白抗体Potassiumiodide规格:>99%,ARIntegrin a7(integrin alpha 7)STEAP1心肌肌球蛋白重链抗体Potassiumiodide规格:含量测定integrin Beta1(ITG- Beta1/CD29)SLC39A6HECT E3泛素链接酶抗体Potassiumhydrogentartrate规格:>98%,BCIntegrin Alpha5(ITG- AlphaV/CD49e)Securin组蛋白去酰化酶11抗体Potassiumguaiacolsulfonatehemihydrate规格:供HPLC法含量测定用Integrin alpha V/CD51 peptideShiga-Like Toxin Type II Variant酸化荷尔蒙敏感脂肪酶抗体PotassiumDihydrogenPhosphate规格:比色法含量测定AR,98%98%5gOVA-sIgG25-OH-ProtopanaxtiolAnti-Phospho-PAK1(Thr423)/PAK2(Thr402)酸化p21激活激酶1/2抗体Anti-Phospho-PAK1(Thr423)/PAK2(Thr402)酸化p21激活激酶1/2抗体48T/96TJAK1(Tyrosine-protein kinase JAK1; Janus kinase 1)SAMDCHHO1蛋白抗体
NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)测试盒(微量法)说明书Transient Receptor Potential Cation Channel Subfamily C, Member 6酰基异香酚CD2 Associated Protein4-基愈创木酚Phospholipase Cε1邻对叔基酚BK virus IgM antiboty2--5-氯酚hydroxyl lysine pyridine moiety2--4-基酚tuberculosisinterferonγreleaseassays2-基-3-酚T-2 Toxin4--3-基酚protein tyrosine phosphatase 1B5-邻酚N.Terminal Propeptide of type ⅡA Collagen2--5-基酚N.Terminal Propeptide of type Ⅱ Collagen四氯酚
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
温馨提示:不可用于临床ZL。