货号:
GOY-N0102
组织来源:
详见说明书
相关疾病:
详见说明书
物种来源:
详见说明书
免疫类型:
详见说明书
细胞形态:
上皮样
是否是肿瘤细胞:
是
器官来源:
详见说明书
运输方式:
详见说明书
年限:
详见说明书
生长状态:
气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度
英文名:
NCI-N87
注册证号:
详见说明书
数量:
39
供应商:
上海谷研
CAS号:
详见说明书
肿瘤类型:
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细胞类型:
贴壁生长
ATCC Number:
NCI-N87
品系:
详见说明书
规格:
详见说明书
实验材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml灭菌烧杯2个; 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个
4、灭菌培养皿1个,细胞培养瓶1个
5、1ml ,200μl移液器各1支;枪头盒2个;无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块;
7、灭好菌的镊子1把,剪刀1把;
8、酒精灯1台; 产品名称 | 人胃癌细胞(2013年新引进)(干细胞库保藏)哪家好 |
种属 | NCI-N87 |
价格 | 来电可享受优惠 |
资源名称 人胃癌细胞(2013年新引进)(干细胞库保藏)
种属:NCI-N87类型:胃形态:上皮样模式菌株:未知培养方法培养基:1. 人胃癌细胞NCI-N87完全培养液配方(100 ml): RPMI 1640 Medium (Invitrogen, 11875-093) 88 ml FBS (Gibco) 10 ml Glutamax(invitrogen 35050)传代方法:(注:该细胞贴壁较慢,建议复苏后让细胞贴壁48h后再进行后续实验操作。)生长条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度生长特性:贴壁生长收到细胞后,在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况:
(一)如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,换 10ml新鲜培养液后继续培养。
(二)如果细胞已长满,即可进行传代培养。
人胃癌细胞(2013年新引进)(干细胞库保藏)哪家好具体步骤如下:
1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒放于37℃培养箱1-3分钟预热,之后翻转培养瓶10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项:
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测,反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。
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