货号:
YSRIBIO-C0151
保存条件:
低温冷藏
供应商:
上海研生
保质期:
详见说明书
CAS号:
详见说明书
英文名:
Adenosinetriphosphatase assay kit
数量:
45
规格:
100管/96样|50管/48样
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称:ATP酶测试盒(测普通组织匀浆的Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶,样本前处理不需高速离心)说明书
英文名称:Adenosinetriphosphatase assay kit
产品规格:100管/96样|50管/48样
发货周期:1~3天
发货周期:1~3天检测指标:ATP酶可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的ATP酶活力。ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷,测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。ATP酶存在于组织细胞膜及细胞器膜上,是生物膜上的一种蛋白酶,它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用。产品优点如下:1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。2、取样量微:本法取手指或耳垂等末梢血20l~50l即可测红细胞膜中的ATP酶,只需5mg左右组织就可测组织匀浆中的ATP酶、0.2g组织可测线粒体及微粒体中的ATP酶。6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。4、再现性好:变异系数CV=1.7%。5、回收试验: X =103.3%。6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。7、测试面广:可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的ATPase。
操作步骤(仅供参考):
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。【细胞冻存】
ATP酶测试盒(测普通组织匀浆的Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶,样本前处理不需高速离心)说明书待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的Z好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,进口来源,保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
Bovine Immunodeficiency Virus(BIV)牛免疫缺损病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒ADAMTS12FastDigest® MluI100 react小鼠胃泌素(Gastrin)免疫试剂盒Bovine Immunodeficiency Virus(BIV)牛免疫缺损病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒alpha Actinin 4-Loading ControlFastDigest® NcoI20 react小鼠胃动素(MTL)免疫试剂盒Bovine Leukemia Virus(BLV)牛白血病病毒PCR试剂盒Alkaline PhosphataseFastDigest® NcoI100 react小鼠胃蛋白酶(PG)免疫试剂盒Bovine Leukemia Virus(BLV)牛白血病病毒染料法荧光定量PCR试剂盒AU1 tagFastDigest® NcoI300 react小鼠维生素K1(VK1)免疫试剂盒Bovine Leukemia Virus(BLV)牛白血病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒AEBP1FastDigest® NdeI100 react小鼠维生素E(VE)免疫试剂盒Regorafenib(BAY73-4506)规格:>99%,多激酶YZ剂phospho-VAV3(Tyr141)英文名称Alpha SNAPFRMD4B蛋白抗体Regadenoson规格:美国进口VAPA英文名称STAT4FRMD7蛋白抗体Red-CLA规格:含氮量:9.00-10.30%VAV2英文名称Mitoferrin 2FRMD4A蛋白抗体Redoil规格:BRVAPB英文名称ST18延胡索酰酰酸水解酶抗体Reboxetinemesylate规格:>97%VLDL Receptor英文名称SALL1FAM101A蛋白抗体
ATP酶测试盒(测普通组织匀浆的Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶,样本前处理不需高速离心)说明书complex IVSemduramicin Discontinuedcomplex IIIAcetyl 2-Deoxy-2-phthalimido-4-deoxy-3,6-di-O-acetyl-β-D-glucopyranosideNADH dehydrogenase3-Methoxycarbonyl-2,2,5,5-tetramethyl-3-pyrrolidin-1-oxylacylated ghrelinMontelukast StyreneAG(11Z)-16-[[2-(Methylamino)-2-oxoacetyl]amino]-11-hexadecenoic Acidficolin 3(S)-Bufuralol Hydrochlorideficolin 2(1S,4S)-N-Desmethyl Sertraline HydrochlorideFibrinogen γ1,5-Diazido-3-oxapentaneIsoform 1 of Fibrinogen alpha chain precursor6-Maleimidocaproic Acid Sulfo-N-Succinimidyl EsterFibrinogen AlphaD-Glucitol-4,5-d2
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
温馨提示:不可用于临床ZL。