乙型肝炎病毒前基因组RNA 探针法荧光定量PCR试剂盒_详细资料

产品信息

货号： ZY-15-55900 保存条件：负20度供应商：上海泽叶生物科技有限公司保质期：一年英文名： Hepatitis B Virus Pregenomic RNA（HBV pgRNA）数量： 10

乙型肝炎病毒前基因组RNA 探针法荧光定量PCR试剂盒
Hepatitis B Virus Pregenomic RNA（HBV pgRNA）
产品及特点：
乙型肝炎病毒前基因组RNA （Hepatitis B Virus Pregenomic RNA（HBV pgRNA））是由副黏病毒科麻疹病毒属的乙型肝炎病毒前基因组RNA （Hepatitis B Virus Pregenomic RNA（HBV pgRNA））引起的急性、烈性传染病。它是世界动物卫生组织（OIE）法定的 A 类传染病，我国将其定为Ⅰ类动物疫病。本产品就是以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测乙型肝炎病毒前基因组RNA 的试剂盒。

产品名称 方法规格价格

乙型肝炎病毒前基因组RNA LAMP试剂盒 LAMP 50次 2490元

乙型肝炎病毒前基因组RNA PCR试剂盒 PCR 50次 1490元

乙型肝炎病毒前基因组RNA 染料法荧光定量PCR试剂盒染料法 50次 2490元

乙型肝炎病毒前基因组RNA 探针法荧光定量PCR试剂盒探针法 50次 3490元

它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据乙型肝炎病毒前基因组RNA 高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。

规格及成分

成分编号 十孔盒包装

探针法 qRT-PCR 缓冲液 A 500μL（黄盖）

探针法 qRT-PCR 酶混合液 B 100μL（红盖）

荧光 PCR 专用模板稀释液 C 1 mL（黄盖）

乙型肝炎病毒前基因组RNA 探针法 qRT-PCR引物混合液 D 100 μL（白盖）

乙型肝炎病毒前基因组RNA qRT-PCR 探针 E 50 μL（棕色管）

乙型肝炎病毒前基因组RNA 探针法 qRT-PCR阳性对照(1×10E8 拷贝/μL) F 50 μL（黄盖）

核酸释释剂（SY装） G 20 次（1mL，绿盖）

使用手册 H 一份

运输及保存： 低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
自备试剂：样品 RNA。
使用方法
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 专用模板稀释液，Z好用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备
7. 如果有N个样品，Z好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也以选购本公司的柱式病毒RNAout。本试剂盒免费赠送20次免RNA提取的核酸释放剂SY装，该释放剂的裂解液可以直接作为RT-PCR模板，省略了RNA提取步骤。
三、Probe qRT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR 管，其中N+2个用于上步得到的 N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4 个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（用第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
10. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）：

成分 样品管N+2个 RT-PCR阴性对照管 标准曲线样品管
（2-7 管）

探针法qPCR缓冲液各 10 μL 10 μL 各 10 μL

探针法 qPCR 酶混合液各 2 μL 2 μL 各 2 μL

乙型肝炎病毒前基因组RNA qRT-PCR探针各 1 μL 1 μL 各 1 μL

乙型肝炎病毒前基因组RNA 探针qRT-PCR
引物混合液各 2 μL 2 μL 各 2 μL

待测样品 RNA 模板各 5 μL -- --

超纯水 -- 5 μL --

第 7 步所得标准曲线样品稀释液（2-7 号） -- -- 各5 μL（2号样到2号管，3号样到3 号管…）

盖上盖子后上机，按下面参数进行 qRT-PCR：

过程温度时间

逆转录 50℃ 30 min

预变性 94℃ 10 min

qRT-PCR 反应（40 个循环） 94℃ 15 sec

60℃ 1 min（采集 FAM 通道的荧光信号）

五、数据处理
12. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
13. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 35，则为阳性。

温馨提示：不可用于临床ZL。

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核酸释释剂（SY装）	G	20 次（1mL，绿盖）
使用手册	H	一份

成分	样品管N+2个	RT-PCR阴性对照管	标准曲线样品管（2-7 管）
探针法qPCR缓冲液	各 10 μL	10 μL	各 10 μL
探针法 qPCR 酶混合液	各 2 μL	2 μL	各 2 μL
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乙型肝炎病毒前基因组RNA 探针qRT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	各 2 μL
待测样品 RNA 模板	各 5 μL	--	--
超纯水	--	5 μL	--
第 7 步所得标准曲线样品稀释液（2-7 号）	--	--	各5 μL（2号样到2号管，3号样到3 号管…）

过程	温度	时间
逆转录	50℃	30 min
预变性	94℃	10 min
qRT-PCR 反应（40 个循环）	94℃	15 sec
qRT-PCR 反应（40 个循环）	60℃	1 min（采集 FAM 通道的荧光信号）