DH5α λpir化学转化感受态细胞

基因型：F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
用途：在DH5α基因组中引入LAMpir,含有R6Kg ori复制子的质粒可以在其中正常复制。pUC19检测转化效率>108 cfu/μg DNA。
使用步骤：
1. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰水中水浴5分钟直至菌块融化，加入质粒或连接产物并用手拨打EP管底轻轻混匀(禁止用枪吸打)，冰水水浴30分钟。
2. 42℃水浴热激90s，迅速放回冰中并静置2分钟,禁止摇晃，否则会降低转化率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (SOC或LB)，混匀后37℃，140 rpm 摇菌培养60分钟。
4. 取所有的菌悬液涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于35-37℃培养箱过夜培养。