产品描述General descriptionT7 RNA 聚合酶通常用于转录DNA,这些 DNA 已经克隆到具有两个相反方向的噬菌体启动子的载体中。可以使用不同的聚合酶,从插入 DNA 的任一链,选择性地合成 RNA。使用该系统可以产生同源标记的单链 RNA。转录物可以用生物素或 DIG-11-UTP 进行非放射性标记,或用 [α-32P] 或 [α-35S] 标记的核苷酸放射性标记至高比活性。杂交探针的合成:T7 RNA 聚合酶能GX生产均一标记的 RNA。该标记的 RNA 可用作 Southern、Northern 和斑点印迹中的杂交探针,以及原位杂交。合适的标记:转录物可以用生物素-16-UTP 或 DIG-11-UTP 进行非放射性标记。它们也可以用 [α-32P]- 或 [α-35S] 标记的核苷酸放射性标记为高比活性。Specificity启动子特异性T7 RNA 聚合酶具有极高的启动子特异性,仅转录噬菌体 T7 DNA 或克隆到T7 启动子下游的 DNA。尽管 T7 和 T3 启动子序列仅相差 3bp,但 T7 RNA 聚合酶仅转录克隆到其启动子下游的DNA。热灭火:通过加入 2 μl 0.2MEDTA(pH8.0)和/或加热至 65℃ 来终止反应。Application• T7 RNA 聚合酶可以转录来自 T7 启动子下游的克隆 DNA 模板的 RNA。可以用标记的 NTP 进行合成以产生高度标记的 RNA。[2]合成的 RNA 有多种应用,包括:RNA 或 DNA 印迹技术• 原位杂交[1]• RNA 酶保护研究:由酶合成的转录物可用作 RNA 剪接和加工研究的前体 RNA。• 通过在转录反应期间加入 m7GpppG 或 m7GpppA 超过 GTP 或 ATP,以在体外合成加帽的 RNA。可以将产生的反义 RNA 引入细胞中,以YZ相应基因的表达。• 微阵列靶标合成包装1个试剂盒包含2个组分Unit Definition一个单位是在 + 37°C 下,60 分钟内,在酸可沉淀的 RNA 产物中掺入 1nmol CMP的酶活性。体积活性:≥20 U/μlPreparation Note激活剂:T7 RNA 聚合酶被 BSA 或亚精胺强烈激活。Other Notes测试缓冲液40mM Tris-HCl,pH 8.0(+ 20℃),6mM MgCl 2,10mM 二硫苏糖醇,2mM 亚精胺,pH 约 8.0(+ 20℃)。缺乏内切核酸酶1。将 1 μg DNA 与 T7 RNA 聚合酶在 + 37℃ 下,在 25 μl 测试缓冲液中孵育 4 小时。显示没有 λDNA 降解的酶单位数 >100 U。2。将 1 μg Eco RI/Hind III 片段的 λDNA 与 T7 RNA 聚合酶在 + 37℃ 下,在 25 μl 测试缓冲液中孵育 4 小时。显示条带图案没有改变的酶单位数 >100 U。缺乏切割活性1 μg pBR322DNA 与 T7 RNA 聚合酶,在 + 37℃ 下,在 25 μl 测试缓冲液中孵育 4 小时。显示没有松弛超螺旋结构的酶单位的数量 >100 U。缺少 RNA 酶4 μg MS2 RNA 与 T7 RNA 聚合酶,在 + 37℃ 下,在 50 μl 测试缓冲液中孵育 4 小时。显示没有 MS2 RNA 降解的酶单位数 >100 U。转录实验中的性能T7 RNA 聚合酶在 SP6/T7 转录试剂盒(目录编号 10 999 644 001)。使用Eco RI和50mCi [alpha-32P] CTP,[400 Ci/mmol(15 TBq/mmol)] 线性化的 0.5 μg pSPT19neo DNA 的标准测定中的掺入率,在20分钟内,产生 >50% 的输入放射性。仅用于生命科学研究。不适用于诊断程序。
温馨提示:不可用于临床ZL。