RNA pull-down+MS:lncRNA-蛋白质互作整体解决方案
一、简介: - lncRNA(Long Non-Coding RNA)被发现在肿瘤发生、免疫应答、机体发育等众多病理、生理过程中发挥重要作用,使得其成为近年来研究的热点。
- 通过高通量的 lncRNA-seq 等手段从样本中高通量的筛选差异表达的 lncNRA,然后「聚焦」一个/几个差异的 lncRNA,对其进行深入的生物学功能和分子机制的解析,是发表较高水准学术文章的常规思路。
- “聚焦”分析一个 lncRNA,要做的实验总体有两个大方向的内容:(1)功能实验。通过干扰(RNAi、knockout)和过表达(over-expression)结合下游的生物学实验手段,解析目的lncRNA的具体生物学功能。(2)分子机制。即发现与目的 lncRNA 的互作蛋白(lncRNA interacting/binding proteins),通过互作的分子机理解析其生物学效应。
- 技术上,高通量筛选和发现lncRNA的特异性互作蛋白,RNA pull-down结合质谱(Mass Spectrometry,MS)是目前主流的技术。上海普赛生物科技有限公司通过技术研发,开发了两种基于质谱(MS)的lncRNA-互作蛋白筛选技术方案:(1)lncRNA pull-down:RNA-蛋白质互作定性解决方案;(2)SILAC+lncRNA pull-down:RNA-蛋白质互作定量解决方案。
二、lncRNA pull-down:RNA-蛋白质互作定性解决方案:
Fig.1. 普赛生物lncRNA pull-down+MS的整体性技术流程。图中展示的实验结果均为普赛生物lncRNA pull-down策略的研发数据。
- 普赛生物lncRNA pull-down技术助力发表的代表性文章:
- Cancer discovery 2016, 6(7):784-801. (IF=19.78)
三、SILAC+lncRNA pull-down:RNA-蛋白质互作定量解决方案: - SILAC+lncRNA pull-down整体技术解决策略:
Fig.2. SILAC+lncRNA pull-down整体实验流程。图中展示绿色原点是通过MS定量获得的、目标lncRNA的特异性互作蛋白(几十个),箭头所指(红色)的一个蛋白,为验证了的目标lncRNA的特异性互作蛋白(SILAC H/L ratio=1.98)。该研究工作刚被Nature Communications接收。 - SILAC: Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture。 点击获知更多SILAC技术详情。
- 将SILAC技术和lncRNA pull-down结合,利用SILAC技术引入到蛋白质上的质谱标签(mass tag)实现对pull-down样品中的蛋白质定量,从而快速锁定lncRNA的特异性相互作用,极大的提高后续pull-down结合western blot验证的阳性率。
- 普赛生物的SILAC+lncRNA pull-down技术方案,能从lncRNA的编码基因开始,直至给出验证阳性的lncRNA特异性互作蛋白的整体技术解决能力。
四、更多互作蛋白质组服务:(一)SILAC+IP-MS:蛋白质-蛋白质互作定量筛选整体解决方案
(二)SILAC+IP-MS(平价版):
(三)SILAC+IP-MS(293T):
(四)IP-MS(平价版):
(五)IP-MS(293T):
(六)lncRNA pull-down:lncRNA-蛋白质互作定性筛选整体解决方案
(七)SILAC+lncRNA pull-down:lncRNA-蛋白质互作定量筛选整体解决方案
(八)SILAC+DNA pull-down:DNA-蛋白质互作定量筛选整体解决方案
(九)SILAC+SM(small molecule) pull-down:小分子-蛋白质互作定量筛选整体解决方案更多技术方案及我司数据展示,请访问我司官网:www.psi-bioscience.com.