超低分子量蛋白电泳试剂盒 报价

超低分子量蛋白电泳试剂盒 报价● 产品组成：

组分货号	组分	名称	规格	贮存
	组分1	18%多肽电泳分离胶预混液	50ml	4℃
	组分2	5%多肽电泳浓缩胶预混液	20ml	4℃
	组分3	10% APS（干粉）	0.5g	室温
	组分4	TEMED	1ml	室温
	组分5	10×阳极缓冲液（下槽缓冲液）	250ml	4℃
	组分6	10×阴极缓冲液（上槽缓冲液）	200ml（干粉）	4℃
	组分7	2×Tricine 上样缓冲液（含还原剂）	1ml	-20℃
	组分8	考马斯亮蓝快速染色液	500ml	4℃

● ：
本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳（多肽电泳）全套试剂，可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶。
● 使用说明：
一. 10% APS配制：
10% APS配制-5 ml：将0.5 g APS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10%APS。
二. 制胶：
I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
2．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
3．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一 （一块0.75mm mini胶用量）*

	分离胶	浓缩胶
	18％T, 5%C /5.0 ml	5％T, 3.3%C/2 ml
18%多肽电泳分离胶预混液	5 ml	/
5%多肽电泳浓缩胶预混液	/	2 ml
10％APS	45-60 μl**	20-30 μl
TEMED	5 μl	2 μl

注：* 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
** 如非必须，不要使用厚度1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
2．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
3．静置30-60分钟待凝胶聚合
三. 电泳：
电泳前，将10×阳极缓冲液（AB080）稀释成1×阳极缓冲液备用；按照标签说明配制10×阴极缓冲液，用蒸馏水稀释成1×阴极缓冲液备用。将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液，内槽加入1×阴极缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品（已经过2×Tricine上样缓冲液[TP050]处理）加入点样孔，80-120V电泳30-60分钟左右，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至150-200V，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要3-4个小时。注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。
四. 染色（使用组分8-考马斯亮蓝快速染色液）：
用前必读：
a 考马斯亮蓝快速染色液不同于实验室常用的考马斯亮蓝G-250染色液(0.025% G-250，10%冰醋酸)，快速染色液不仅具有染色多肽功能外，还具有固定小肽的作用，使得小肽不容易在染色和脱色中从PAGE中漂离。常规的G-250染色液在染色中，低于5KD的小肽容易从胶中漂离。
b 使用前如发现瓶中有少许沉淀，请混匀后使用。
c 以下“使用方法”是针对0.75mm厚度，10×10cm凝胶染色程序。
1. 漂洗：
将电泳后的PAGE胶取下放入微波炉专用塑料容器中，加入适量超纯水（以刚刚覆盖过胶面为适），微波炉中高火（700-800瓦）加热，至溶液沸腾后继续煮沸1-2分钟；取出容器均匀摇动数下；重复上述步骤2-3次；弃尽水溶液。
2. 染色：
加入适量染色液（用量根据凝胶面积的大小及容器大小而定，以浸没胶面为准），放入微波炉中高火（700-800瓦）加热，溶液沸腾后继续煮沸1-2分钟；取出容器均匀摇动数下；重复上述步骤数次，直至蛋白条带清晰可见时即可停止加热；弃去染色液（收集到备用容器中，可以反复利用1-2次）。
注：a 此步骤是染色的关键步骤，染色停止的标准是条带清晰可见。如由于挥发导致染色液减少，可适当补加染色液。
b 如使用1.0mm或更厚的凝胶，染色煮沸时间会相应延长。
3. 脱色：
加入适量超纯水（以刚刚覆盖过胶面为适），放入微波炉中高火（700-800瓦）加热，至溶液沸腾后继续煮沸1-2分钟；取出容器均匀摇动数下；重复上述步骤1-2次，此时PAGE胶的蓝色背景应已去除。
4. 保存：
弃去水溶液，加入适量超纯水，观察和保存染色结果。
● 染色液使用注意事项：
1） 使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm的凝胶，如果使用更大面积或更厚的凝胶，请加入更多的染色液并延长各步骤的时间。
2） 对于SDS-PAGE胶，步骤1的漂洗非常重要，因为残余的SDS会严重影响后续的染色。
3） 本染色液可以重复利用1-2次，敏感性没有明显下降。
4） 本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。使用后，请盖好瓶盖，4℃密封保存。
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