裸鼠成瘤模型
由于裸鼠的免疫缺陷,在一定情况下,不排斥来自异种动物的组织移植,因此,可用其建立理想的人类肿瘤可移植实验动物肿瘤模型。
实验步骤
1.细胞复苏
从液氮中取出冻存的U87-MG细胞,迅速放入37℃水浴箱中,快速融化,加入含10%胎牛血清的DMEM/High培养基,接种于T25 培养瓶中,37℃,5%CO2孵箱常规培养传代。
2.细胞传代培养
弃培养瓶中旧培养液,用无菌PBS冲洗两遍,将胰蛋白酶-EDTA 1 ml加入到培养瓶中消化细胞,倒置相差显微镜下观察,待镜下细胞出现筛网状空隙时倒掉胰酶,加入含10%胎牛血清的DMEM/High培养基至覆盖培养瓶底,移液管反复吹打,使细胞悬浮,将细胞悬液移入离心管中1000r/min离心5min,弃上清液,按1:2~1:4传代,在37℃、5%CO2孵箱进行培养,2~3天换液,选择对数期的细胞用于实验。
3.接种制备
加入无菌PBS,轻轻吹打细胞沉淀,混匀成细胞悬液,细胞计数,使细胞密度达到 1×107个/ml;在超净台中,用75%酒精消毒裸鼠背部,于皮下(大部分选择腋下接种)注射0.1 ml细胞悬液。
4.结果观察
一般接种7-10天左右可以见到皮下开始出现肿块。
注意事项
1.接种细胞的选择:取处于对数生长期的细胞。细胞的状态是成瘤实验的关键,细胞达80-90%左右密度为宜。细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下,一般尽量在半小时内完成,途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。
2.裸鼠的选择:选择的裸鼠一般在5-8周龄,体重18-20g左右;种植部位选择血供丰富区域,如腋窝中后部、腹股沟中上部;左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤,小拇指夹住裸鼠尾巴进行保定。
3.接种方式:接种前用枪将细胞悬液充分的吹散,防止细胞成团而降低细胞成活率;接种时,针头在皮下进针深一点,约1cm深,减少注射后细胞悬液从针眼溢出。
4.结果判定:肿瘤大小测量一般为1周两次,用游标卡尺测量瘤体Z长径(a)和Z短径(b),按公式计算肿瘤体积(V)的大小,V(mm3)=1/6πab²。
服务项目
可包含裸鼠的购买、饲养、造模、取材及后续指标的检测等。
实验流程
裸鼠饲养→细胞培养→模型制备→结果判定