本免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(Lysis Buffer for WB/IP Assays)是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液,主要成分为20mM Tris-HCl(pH7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及焦磷酸钠,β-甘油磷酸,正钒酸钠,EDTA和抑肽酶等多种YZ剂,可广谱且有效YZ蛋白降解,并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品,适用于PAGE,蛋白免疫印迹(WesternBlot),免疫沉淀(IP),免疫共沉淀,ELISA等实验。经本品裂解收集的蛋白样品,可使用增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号:MP1902-500T)测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度。产品组成保存与运输方法 1)为了取得的使用效果,建议次使用本品的时候将裂解液分装冻存,避免反复冻融。2)裂解样品的所有步骤需在冰上或4℃进行。A, 培养的细胞样品1) 充分融解WB/IP裂解液,之后混匀。取适当量的裂解液,使用前数分钟内加入PMSF(100mM),使其浓度为1mM。悬浮细胞:离心收集细胞,用手指弹散细胞。按照六孔板的每孔细胞加入100-200μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。大团细胞比较难裂解充分,少量细胞则由于接触充分,先对比较容易充分裂解。3) 充分裂解后,10,000-14,000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和免疫共沉淀等实验。【裂解液用量说明】:通常6孔板每孔细胞加入100μl裂解液已经足够,如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150μl或200μl。1) 将组织剪切成细小的碎片。
温馨提示:不可用于临床ZL。