货号:
ZY15-ZY14410
供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
数量:
30
保质期:
有效期一年
保存条件:
‘-20℃保存
规格:
50次
PCR使用注意事项1. 试剂盒中的所有组份,在室温~37℃完全融化后,用移液枪吸打混匀或将Microtube上下颠倒混匀,尽量避免剧烈振荡。混合10×LA PCR Buffer, LA Taq时, 为防止起泡或酶失活,需注意仔细轻轻混合。融化后的各组份在使用前请置于冰中保存。2. 配制反应液时,使用移液器轻轻吸打混合,不能剧烈振荡。3. 扩增长片段DNA时的引物特异性要高。引物的推荐长度为25-30 mers。4. 尽量使用高纯度的模板DNA。扩增长片段DNA时的模板使用量为通常PCR时的4~5倍。
步骤、过程:构建一段寡核苷酸探针:5’端标记荧光染料报告基团,3’端标记淬灭染料基团。当探针保持完整时,淬灭基团的靠近会通过空间上的荧光共振能力转移(FRET)而显著降低由报告染料基团发射的荧光。如果存在目标序列,探针便会在其中一个引物结合位点的下游发生退火,并随着引物的延伸通过Taq DNA聚合酶的5’核酸酶活性,完成切除。探针的切除将会引起:将报告染料基团和淬灭染料基团进行分离,增强了报告染料基团的信号。将探针从目的链上去除,使引物继续沿模板链末端延伸。因此,探针的介入并不会YZ整个PCR过程。内源性对照:数字 PCR 不依赖内源性对照品进行参考测量。对于内源性对照进行扩增可用于对加入至反应的样品 RNA 或 DNA 的量进行标准化。对于基因表达定量,研究者采用过 ß-肌动蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH)、核糖体 RNA (rRNA) 或其他 RNA 作为内源性对照。标准品:因为数字 PCR 通过阴性与总平行样的比例确定分子计数,所有无需标准品。 由于样品量会除以校准品的量,所以标准曲线中的单位便被去除了。因此,对于标准品来说,只需知道其相对稀释比。对于相对定量,任何含有合适目标分子的 RNA 或 DNA 储存液都可用于制备标准品。每经过一个循环,就会有更多的报告基因染料分子从各自的探针上切断,荧光强度会随着合成的扩增片段数量的增加而增加。
温馨提示:不可用于临床ZL。