货号:
KL13-34750
供应商:
上海康朗生物科技有限公司
数量:
30
保质期:
有效期一年
保存条件:
‘-20℃保存
规格:
50次
PCR使用方法:一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。2. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂SY装。则按下面步骤操作: 3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例:在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水,充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置,但Z好在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。4. 在标记好的 N+2 个离心管中,加入 1-5mg 固体样品(半粒芝麻大小,如奶酪)或5uL 液体样品(如牛奶)待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照,在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,确保固体样品被溶液淹埋,如果是液体样品则震荡混匀。6. 95℃保温 10 分钟。7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。二、设置 PCR 反应(40 uL 体系) 8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分,下面以样品数为 1 举例(注意:如果次使用DNA 释放剂,Z好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应,两个反应的模板使用量差 10 倍,由此确定用量,以后就用效果好的那个模板用量): 成份 | 样品(用量1) | 样品(用量2) | 阳性对照 | 阴性对照 |
即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
超纯水 | 不加 | 16 uL | 16 uL | 16 uL |
9. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 PCR。 过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 94℃ | 10分钟 |
PCR 反应 (35 个循环) | 94℃ | 45s |
56℃ | 45s |
72℃ | 45s |
延伸 | 72℃ | 5分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩增
温馨提示:不可用于临床ZL。