硅胶珠型microRNA分离试剂盒

硅胶珠型microRNA分离试剂盒

FUJIFILM Wako提供能使从Ago 免疫沉淀到RNA 提取等一系列实验操作简化的“microRNA Isolation Kit”系列。使用本系列试剂盒能简便地从人和小鼠的细胞或组织中提取Ago蛋白结合的microRNA以及靶mRNA，还能从培养上清、血清、血浆中提取游离Ago蛋白结合的microRNA。所提取到的RNA可以应用于qPCR、微阵列检测、NGS等下游实验。本系列包括采用磁珠的MagCapture™ microRNA Isolation Kit，以及采用了硅胶珠法的microRNA Isolation Kit。

microRNA Isolation Kit抗Ago抗体固定珠子具有非特异吸附性低的特征，它采用二氧化硅基聚合物珠粒，以离心为基础进行免疫沉淀操作。在从免疫沉淀后的硅胶珠中提取RNA的步骤时，采用苯酚/氯仿提取（P/C法）及乙醇沉淀来提取RNA。FUJIFILM Wako推出含有固定了抗Ago1抗体（2A7）、抗人Ago2抗体（4G8）、抗小鼠Ago2抗体（2D4）、抗人Ago3抗体（1C12）的硅胶珠的4种试剂盒。

◆试剂盒组成（以Human Ago2为例，10次用）

1.　Anti-Human Ago2 Antibody Beads Solution：500 μL×1瓶

2.　Cell Lysis Solution：50 mL×1瓶

3.　Elution Solution：500 μL×1瓶

4.　Ethachinmate：30 μL×1瓶

5.　3 mol/L Sodium Acetate：400 μL×1瓶

◆操作示意图

◆试剂盒使用实例

用microRNA Isolation Kit, Human Ago2通过Urea-PAGE分离从三种5×10⁶ cells的人培养细胞株（HeLa、HepG2、HEK293），和小鼠培养细胞株（P388D1）中提取的microRNA组分，再进行银染（311-03961、CLEAR STAINAg、20 tests）检测。结果表明能从人培养细胞中特异性提取microRNA（图1）。以同样的银染试剂，检测用microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2从5×10⁶ cells的人培养细胞（HeLa）和啮齿动物培养细胞株（P388D1、CHO、PC-12）中提取的microRNA组分。结果表明，能从三种啮齿动物培养细胞株中特异性提取microRNA而不能从人细胞株中提取（图2）。

图1.通过用Human Ago2提取的microRNA的进行银染检测

图2. 对Mouse Ago2提取的microRNA的进行银染检测