pUAST果蝇编辑质粒

基本信息

原核抗性:	氨苄青霉素Amp

质粒简介
            pUAST consists of five tandemly arrayed optimized GAL4 binding sites followed by the hsp70 TATA box and transcriptional start , a polylinker containing unique restriction sites for EcoRI, BglII, NotI, Xho, KpnI and XbaI and the SV40 small T intron and polyadenylation site. These features are included in a P-element vector (pCaSpeR3)containing the P element ends (P3' and P5') and the white gene which acts as a marker for successful incorporation into the Drosophila genome. More information: Brand and Perimon (1993) Development 118 401-415 P element-based vector for Gal4-regulated expression of genes in Drosophila.

质粒图谱

 
pUAST果蝇编辑质粒使用说明：
    
     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
     4、42℃热激90s，再冰浴2min；
     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
 
pUAST果蝇编辑质粒注意事项：
 
      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。