慢病毒载体系统是一种能非常GX的把外源基因稳定整合到哺乳动物细胞中的载体工具。除了常规质粒转染外,目前该系统也是把外源基因转入哺乳动物细胞的Z常用方法之一。由于具有目的基因和启动子选择的灵活性以及转染细胞类型的广泛性两大特点,使得慢病毒载体系统成为倍受欢迎的外源基因表达系统。
慢病毒载体来源于人类免疫缺陷病毒HIV,属于逆转录病毒家族。野生型慢病毒基因组是线性双正链RNA。
慢病毒重组载体构建完成后与辅助质粒一起转染进入包装细胞。在包装细胞中,位于两个长末端重复序列(LTR)之间的DNA片段会被转录成RNA,由辅助质粒表达的病毒蛋白将其包装形成病毒颗粒。包装后的活体病毒将会被释放到上清液中,可以直接收集或进一步浓缩病毒转染靶细胞。
当病毒转导靶细胞时,释放到宿主细胞中的病毒RNA借助逆转录酶逆转录成双链DNA,然后随机整合进宿主细胞的基因组中。在病毒载体中,位于两个LTR的DNA片段和病毒基因组都会稳定整合到靶细胞的基因组中。
通过改造优化,我们的慢病毒载体删除了与病毒包装和转导相关的基因(这些基因由辅助质粒进行表达,用于病毒包装过程),使产生的慢病毒颗粒是复制缺陷型的。即包装的病毒只具有转导靶细胞的能力,而无法在靶细胞中进行大量复制,因而具有很高的生物安全性。
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