猪瘟病毒(CSFV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)_详细资料

产品信息

货号： XY-SD-R-1301 CAS号：猪病供应商：上海烜雅生物科技有限公司数量： 850 英文名： Cystic Fever Virus (CSFV) Nucleic Acid Detection Kit (RT-PCR) 保质期： 6个月保存条件： -20℃ 规格： 48T/25T

【产品名称】
商品名称：猪瘟病毒(CSFV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)
Name ：Cystic Fever Virus (CSFV) Nucleic Acid Detection Kit (RT-PCR)
【包装规格】48T/盒
猪瘟病毒(CSFV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)【预期用途】
本试剂盒适用于检测标本中指标的定量检测，辅助诊断。
【试剂组成】

名称规格

酶液 50μL×1 管

反应液 1.0mL×1 管

阳性质控品 50μL ×1 管

阴性质控品 250μL ×1 管

核酸提取液 1.5ml×2管

详见说明书
猪瘟病毒(CSFV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)【检验原理】
本试剂盒对指标特异核酸序列设计引物和探针，用一步法荧光RT-PCR 技术对指标 RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
注：
1）不同批号试剂不能混用。
2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
猪瘟病毒(CSFV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
【标本采集】
咽拭子：应使用与用采样拭子，适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将拭子放入标本采集管中，旋紧管盖并密封，以防干燥。
全血：疑似感染病人的静脉血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，8000rpm 离心 2min，取适量上清液于 1.5mL 灭菌离心管中。痰：以清晨的口痰为宜。先用清水漱口，嘱患者用力咳出深部的痰于无菌样本保存管，密封，即可送检。

【标本采集】
病死或扑杀禽，取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织；待检活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理盐水中。
猪瘟病毒(CSFV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但丌能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

1.2DNA 提取
1) 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.2 RNA 提取
推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的RNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂反应液酶液

用量 20μL 1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。
3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择：检测通道（Reporter Dye）FAM，淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：

步骤循环数温度时间收集荧光信号

1 1 cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycles 94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、
stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且有明显的扩增曲线。
可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显曲线的样本建议重复试验，重复试验结果如果同样出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线则为阳性，否则为阴性。
阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
6. 质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线且无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32；以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
① 样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
②样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
③阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
④病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
⑤不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
⑥试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
猪瘟病毒(CSFV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)【注意事项】
① 所有操作严格按照说明书进行；
②试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
③反应液应避光保存；
④反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
⑤使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服；
⑥样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
⑦实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
⑧试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
猪瘟病毒(CSFV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀动物，取水泡皮及水泡液；待检活动物，取 O/P 液 2~3mL。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【产品图片】
【生产企业】
企业名称：上海烜雅生物科技有限公司
生产地址：金海公路3265号14幢11546室

上海烜雅生物科技有限公司生产的猪瘟病毒(CSFV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。

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本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。

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