一、刚果红(淀粉样物质)染色简介淀粉样物质是一种无细胞的同质性的嗜伊红性物质,因为在用碘染色时与淀粉的反应相似,固称为淀粉样物。
二、染色步骤1、切片脱蜡至水,
2、用刚果红甲醇液染10min
3、用碱性酒精分化数秒(需于镜下控制,勿使之过度分化)
4、流水冲洗3-5min
5、苏木素复染 2 min
6、水洗10-15min
7、常规脱水,透明,封固
三、样本说明1、石蜡切片取材:1、组织离体后需及时固定;2、组织标本不宜过大、过厚。
固定:1、固定液:10%(4%多聚.甲醛)或10%中性甲醛;2、用量:一般固定液的量与组织体积比为10:1~20:1;3、固定:适宜的固定时间,主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片经60℃烤片3-5小时后,可于常温或4℃干燥保存。
2、冰冻切片取材:取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。
固定:样本冰冻切片后,应立即放入甲醇、丙.酮、95%酒精、4%多聚.甲醛等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然风干,密封后置于-80℃、-20℃保存,尽快用于后续实验。
3、细胞块石蜡切片细胞量较多的样品,可离心分离所需细胞,用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块,然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。
4、细胞爬片在孔板里做的细胞爬片,爬片取出后,用PBS洗涤2次(根据研究目的,PBS洗涤可选择不做),用4%多聚.甲醛4℃固定15分钟,将表面液体吹干,置于-20℃保存。若在短时间内即开展实验,可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段时间。
5、细胞涂片细胞涂片常用的固定液有95%酒精(Z为常用)、酒精-冰醋.酸液、Ethyl ether-酒精液和Carney’s液等。
四、注意事项1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚.甲醛,能使大多数抗原保存良好,适用于免疫组织化学。
2、病理实验切片Z好是防脱片,以免实验过程中出现掉片。若客户提供切片,应告知切片有无防脱处理。
3、骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本,实验过程中有较高的掉片几率。
4、客户可提供组织块(以10%、4%多聚.甲醛或10%中性甲醛固定,如组织块极小请事先说明)、蜡块或切片(使用免疫组化专用切片,以避免实验过程中掉片)
5、待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。
6、若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验,需进行脱钙处理。
7、浸泡在固定液中的组织样本,在运输中容器需密封,防止破碎、渗漏。
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