小鼠表皮黑色素细胞提取物说明书

货号： GOY-0481B 组织来源： 详见说明书 相关疾病： 详见说明书 物种来源： 人/小鼠/大鼠/其他 免疫类型： 详见说明书 细胞形态： 详见说明书 是否是肿瘤细胞： 详见说明书 器官来源： 详见说明书 运输方式： 常温运输/干冰运输 年限： 详见说明书 生长状态： 贴壁；悬浮 英文名： Mouse Skin: Normal MelanocytesDerivatives 注册证号： 详见说明书 数量： 50 供应商： 上海谷研 CAS号： 详见说明书 肿瘤类型： 详见说明书 细胞类型： 详见说明书 ATCC Number： Mouse Skin: Normal MelanocytesDerivatives 品系： 详见说明书 规格： 1.2ML/1.5ML

小鼠表皮黑色素细胞提取物说明书【Mouse Skin: Normal MelanocytesDerivatives】
      小鼠表皮黑色素细胞提取物是从小鼠原代表皮黑色素细胞提取的，小鼠原代表皮黑色素细胞从正常小鼠皮肤组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
      总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
               cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
              蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人癌组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。
              潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

实验操作：
1、 小鼠表皮黑色素细胞提取物说明书新生小鼠拉颈椎处死，乙醇消毒腿部，在超净工作台内，取肌肉于平皿，Hank’s洗3次，剔除脂肪、结缔组织，将肌肉标本剪约0.1cm3小块；
2、 将剪碎的肌肉移至离心管，Hank’s洗3次，静置1min，弃去上层液及漂浮组织
3、 向上述离心管中加入0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次离心管，然后加入生长培养基终止消化；
4、 反复吹打后，依次100，200，400目过筛，滤液收集后，1000r/min离心10min；
5、 弃去清夜，用生长培养基重悬细胞，悬液加入未经PPL包被的培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度培养1h后，转移包被瓶中，生长培养基培养，4d换液，以后每天换液1次。

实验试剂：
1、小鼠表皮黑色素细胞提取物说明书培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement
2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO
3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S
4、染色液： 0.4% Trypan Blue
5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit
6、检测试剂：鼠抗人及大鼠desmin一抗，肌球蛋白（myosin）单克隆抗体
服务特点：
1. 小鼠表皮黑色素细胞提取物说明书细胞纯度高：原代分离得到的目的细胞纯度可达到95%以上；
2. 细胞活力强：原代分离的细胞一般不能长久传代，提供P0-P3代的细胞，活力达80%以上，无污染；
3. 多种鉴定方式：可根据需求提供流式细胞检测、免疫细胞化学、Realtime PCR及蛋白印迹等多种检测方法。
原代细胞分离：
一、小鼠表皮黑色素细胞提取物说明书细胞培养
1取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。2培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3冻存及复苏（可参阅后面有关章节）为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
二、原代细胞分离
凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，Z简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。2实体组织材料的分离方法对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。
三、细胞增殖检测技术
目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂
的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然，细胞活力检测法并不能证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但药物的干扰可YZ凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。所以Z直接的证据应该采用方法一。
其中常见检测：CCK8检测法 ，MTT检测法，Brdu检测法，Edu检测法，平板克隆形成。
四、细胞周期检测技术
细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。
常用的方法：流式检测细胞周期，标记有丝分裂百分率法。
五、细胞凋亡检测
常见检测方法：流式检测细胞凋亡，线粒体膜电位，活性氧检测，Hoechst染色，电镜，TUNEL。
六、细胞转移能力检测
常见检测方法：细胞划痕实验，Transwell实验，Invasion实验
Promocell C-21110 Mammary Epithelial Cell GrowthMedium KIT, 上皮细胞生长培养基套装 500ml
人颅骨造骨细胞裂解物HCOL
IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人细胞裂解液 (阳性对照)
LX-2细胞，人肝星形细胞正常 人胚胎眼巩膜成纤维细胞,HFSF细胞 家猫肺细胞;FCA-L2
LoVo(人大肠癌细胞) 5×106cells/瓶×2
小鼠淋巴瘤细胞;EL4
IKB beta  核因子κBYZ蛋白β抗体规格： 0.2ml
phospho-IkB beta (Ser23)  磷酸化KBYZ蛋白β抗体规格： 0.1ml
IKB alpha   核因子κBYZ蛋白α抗体规格： 0.1ml
phospho-IKK alpha (Thr23)  磷酸化KBYZ蛋白激酶α抗体规格： 0.1ml
phospho-IKK alpha (Tyr463)  磷酸化KBYZ蛋白激酶α抗体规格： 0.1ml
小鼠表皮黑色素细胞提取物说明书补体1YZ因子检测试剂盒　规格：　48T/96T
补体3a检测试剂盒　规格：　48T/96T
补体3a检测试剂盒　规格：　48T/96T
补体3a检测试剂盒　规格：　48T/96T
补体3a检测试剂盒　规格：　48T/96T
补体C3转化酶检测试剂盒　规格：　48T/96T
补体C5转化酶检测试剂盒　规格：　48T/96T
补体成分1q子成分A检测试剂盒　规格：　48T/96T
补体成分1q子成分C检测试剂盒　规格：　48T/96T
补体成分1q子成分样蛋白1检测试剂盒　规格：　48T/96T