中杉金桥DS-0005Polymer双染检测试剂盒(Mo/AP+Rb/HRP)_详细资料

产品信息 货号： DS-0005 保存条件：已收到实际货物为准供应商：北京诺博莱德科技有限公司保质期：已收到实际货物为准数量： 99 规格： 6ml 详细信息： 规　　格： 6ml 试剂盒内容： 试剂名称规格 试剂1 辣根酶标记山羊抗兔IgG聚合物 3ml 试剂2 碱磷酶标记山羊抗小鼠IgG聚合物 3ml 试剂3A DAB稀释液（即用型） 6ml 试剂3B DAB浓缩液（20×） 0.5ml 试剂4A GBI—久红底物液（即用型） 15ml 试剂4B GBI—久红活化剂（5×） 3ml 试剂4C GBI—久红色素底物（100×） 150μl 试剂5 Simpo—Mount封片剂 6ml 标本染色： 1. 固定：为确保能够获得高质量和可重复性的染色结果，使用者必须提供经恰当固定和制备的组织切片。 2. 组织需使用经过防脱片处理的载玻片以防染色过程中脱落。 3. 石蜡包埋的组织切片需经过二甲苯脱蜡和逐级酒精脱水。 4. 细胞涂片需要尽可能为单层细胞，以期获得满意结果。 5. 三种对照片可对实验结果的解读有所帮助：阳性对照、试剂对照（使用同种型对照试剂）和阴性对照。 6. 免疫组化染色：从此步骤开始，不要让切片干片。 7. 将切片放置于辣根酶和碱磷酶阻断液（推荐使用Klear Dual Enzyme Block E36）中孵育10分钟，蒸馏水冲洗至少两次。 8. 根据厂家所提供的一抗修FF式对组织切片进行修复，PBS（含0.05% Tween 20）或TBS-T冲洗，2分钟×3次。 9. 封闭（可选择）：对于石蜡切片，此步骤可改善染色结果；对于冰冻切片，可视固定方式酌情取舍。 10. 加入足够量的两种一抗混合物于切片上，湿盒中孵育，PBS（含0.05% Tween 20）或TBS-T冲洗，2分钟×3次。注意：使用者必须在进行双染之前确定合适的一抗稀释度和孵育时间。 11. 将两种二抗按照所需要的量等比例混合，充分混匀，每张切片加入50-100μl混合二抗，湿盒中孵育30分钟，PBS（含0.05% Tween 20）或TBS-T冲洗，2分钟×3次。 12. DAB染色:临用前制备DAB工作液，在1ml试剂3A（DAB稀释液）中，加入约50μl试剂3B（DAB浓缩液），混合均匀，即配成DAB工作液。此溶液必须现用现配，配好后避光保存，7小时内用完。滴加足以覆盖组织的上述DAB工作液，镜下观察显色情况，约需要5分钟。蒸馏水冲洗以终止反应，TBS-T冲洗，2分钟×3次 13. GBI-久红染色：在1ml的试剂4A（GBI—久红底物液）中加入200μl的试剂4B（GBI—久红活化剂，注意使用前摇匀），混匀，再加入10μl的试剂4C（GBI—久红色素底物）于上述混合液中，再次混匀。如果一次使用量不多，也可按照上述比例配制合适量的显色液。在每张切片上加入50-100μl或足以覆盖组织的上述工作液，孵育10分钟，镜下观察显色情况。为增强染色效果，可再次新鲜配制上述液体，并重复上述过程。蒸馏水冲洗终止显色。注意：新鲜配制后立即使用，配制过程中注意将4B溶液摇匀后使用 14. 苏木素复染：复染数秒，不要过染。自来水冲洗2-3分钟。放入PBS中返蓝（约0.5-1分钟），去离子水冲洗。 15. 封片：滴加足够量的试剂5（Simpo-Mount封片剂）覆盖组织，轻轻旋转切片使封片剂均匀平铺覆盖组织，不要加盖玻片。 16. 水平放置切片，40-50℃烤箱中至少30分钟或者室温水平放置直到完全变干，变硬的封片剂是一种保护屏障防止有机溶剂侵蚀显色剂。 注意事项： 1. 固定方式和时间、组织切片厚度、抗原修FF式、一抗稀释度和孵育时间等方面的因素都会对结果产生影响，在对实验结果进行分析时使用者应该充分考虑上述因素。 2. 假如需要加盖盖玻片，将已覆盖上述变硬的封片剂的切片置于二甲苯中并立即取出，滴加中性树胶，盖上盖玻片即可。 3. GBI—久红不溶于有机溶剂，也可以用盖玻片，但是脱水步骤必须短暂，以便信号不脱失。建议： a) 80%酒精，20秒，一次 b) 95%酒精，20秒，一次 c) 酒精，20秒，三次 d) 二甲苯，20秒，1次 e) 加一滴二甲苯基质的封片剂（建议使用GBI的O-Mount E02-18）并封片。注意轻压以便排除气泡。 4. DAB可能是致癌物质，请采取必要的防护措施。 温馨提示：不可用于临床ZL。

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